[發明專利]用于人源糞便DNA甲基化分析的核酸純化方法有效
| 申請號： | 201811458096.0 | 申請日： | 2018-11-30 |
| 公開（公告）號： | CN109439726B | 公開（公告）日： | 2021-11-02 |
| 發明（設計）人： | 王美叢;劉晶;秦楠 | 申請（專利權）人： | 上海銳翌生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6806 | 分類號： | C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201 | 代理人： | 趙天月 |
| 地址： | 201114 上海市閔行區*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 用于 糞便 dna 甲基化 分析 核酸 純化 方法 | ||
1.一種獲得用于DNA甲基化分析的核酸樣本的方法，其特征在于，包括：
將初始人源糞便核酸樣本與亞硫酸鹽試劑以及保護劑進行第一混合處理；
將第一混合處理產物在溫度為94~96℃的條件下進行5~15分鐘的變性處理；
將變性處理產物在溫度為75~80℃的條件下進行40~50分鐘的轉化處理；
將轉化處理產物與磁珠以及第一洗液進行第二混合處理；
將第二混合處理產物在溫度為21~25℃、轉速為900~1100 rpm的條件下進行45~60分鐘的第一孵育處理；
將第一孵育處理產物進行第一離心處理，以便獲得第一離心沉淀物；
將所述第一離心沉淀物與第二洗液進行第三混合處理；
將第三混合處理產物進行第二離心處理，以便獲得第二離心沉淀物；
將所述第二離心處理沉淀物在室溫條件下靜置干燥3~5分鐘；
將干燥處理產物與洗脫液進行第四混合處理；
將第四混合處理產物在室溫條件下進行5~10分鐘的第二孵育處理；
將第二孵育處理產物進行第三離心處理，以便獲得上清液，所述上清液中包含用于DNA甲基化分析的核酸樣本；
其中，所述初始人源糞便核酸樣本是以將DNA溶于水或TE緩沖液的形式提供的，所述初始人源糞便核酸樣本的質量為0.1~2μg，所述初始人源糞便核酸樣本的體積為10~100μL，
所述亞硫酸鹽試劑是以溶于水的形式提供的，基于所述亞硫酸鹽試劑水溶液的總體積，亞硫酸氫鈉的質量體積分數為40-50%，亞硫酸鈉的質量體積分數為8-12%，氫氧化鈉的濃度為0.1-0.2mol/L，所述亞硫酸鹽試劑水溶液的總體積為150-300μL，
所述保護劑是6 -羥基-2,5,7,8 甲基-苯并二氫吡喃- 2 -羧酸和對苯二酚的二乙二醇二甲醚溶液，基于所述保護劑的總體積，所述6 -羥基-2,5,7,8 甲基-苯并二氫吡喃- 2-羧酸的質量體積分數為8-12%，所述對苯二酚的質量體積分數為5~10%，所述保護劑的總體積為25-50μL，
所述磁珠是以分散于水中的形式提供的，所述磁珠的水分散液的總體積為50~100μL，基于所述磁珠的水分散液的總體積，所述磁珠的質量體積濃度為45~55mg/mL，所述磁珠為超順四氧化三鐵顆粒或超順三氧化二鐵顆粒，所述磁珠的外表面包被有二氧化硅，所述二氧化硅修飾有羧基；
基于所述第一洗液的總體積，所述第一洗液包括5-20%的聚乙二醇，5-10%的氯化鈉，0.1-0.2mol/L的乙酸鈉，2-5mmol/L的乙二胺四乙酸，2-5mmol/L的三羥甲基氨基甲烷，10-20mmol/L的異硫氰酸胍，40-50％的無水乙醇以及余量的水，
所述第二洗液為體積濃度為70-80％的無水乙醇的水溶液，
所述洗脫液為無核酸酶DEPC水，所述洗脫液的體積為45~55μL。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一洗液的總體積為800-1000μL，所述第二洗液的總體積為400~600μL。
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