[發明專利]一種酶法拆分制備(S)-1,2,3,4-四氫異喹啉-3-甲酸的方法

有效

• 申請號: 201811454845.2
• 申請日: 2018-11-30
• 公開（公告）號: CN111254180B
• 公開（公告）日: 2023-04-28
• 發明（設計）人: 吳堅平;居述云;楊立榮;施俊巍;錢明心
• 申請（專利權）人: 浙江大學;蘇州同力生物醫藥有限公司
• 主分類號: C12P41/00
• 分類號: C12P41/00;C12P17/12
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司 32103
• 代理人: 汪青;向亞蘭

1.一種酶法拆分制備(S)-1,2,3,4-四氫異喹啉-3-甲酸(I)的方法，

所述方法包括：

(1)以1,2,3,4-四氫異喹啉-3-甲酸的外消旋體或1,2,3,4-四氫異喹啉-3-甲酸鹽的外消旋體為底物，利用離體的D-氨基酸氧化酶或胞內表達D-氨基酸氧化酶的細胞作為催化劑，選擇性催化(R)-1,2,3,4-四氫異喹啉-3-甲酸進行氧化脫氫反應，而(S)-1,2,3,4-四氫異喹啉-3-甲酸未反應，保留在反應體系中；所述D-氨基酸氧化酶具有如SEQ?ID?NO.1、SEQID?NO.2、SEQ?ID?NO.3或SEQ?ID?NO.4所示的氨基酸序列；

(2)將所述(S)-1,2,3,4-四氫異喹啉-3-甲酸與反應體系分離。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述1,2,3,4-四氫異喹啉-3-甲酸鹽為1,2,3,4-四氫異喹啉-3-甲酸的堿金屬鹽或銨鹽。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述細胞為表達D-氨基酸氧化酶的工程菌，所述工程菌的宿主細胞為E.coliBL21(DE3)。

4.如權利要求3所述的方法，其特征在于，所述工程菌含有表達載體pET-28a(+)，所述D-氨基酸氧化酶基因連接在表達載體pET-28a(+)上。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，首先構建反應體系，然后控制反應體系處于設定溫度和有氧環境中進行所述氧化脫氫反應，其中所述反應體系包含所述底物、pH緩沖溶液和/或pH調節劑以及所述催化劑。

6.如權利要求5所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述反應體系中，起始底物的濃度為1～20g/L，反應體系的pH值為6～9；所述的催化劑為含有所述離體的D-氨基酸氧化酶的粗酶液或者純酶或者固定化酶或胞內表達D-氨基酸氧化酶的細胞；所述設定溫度為20～70℃。

7.如權利要求5所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述設定溫度為30～50℃，所述反應體系的pH值為7～8。

8.如權利要求6所述的方法，其特征在于，所述催化劑采用含有離體的D-氨基酸氧化酶和黃素腺嘌呤二核苷酸的粗酶液。

9.如權利要求1或5所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，使所述氧化脫氫反應在輔酶黃素腺嘌呤二核苷酸存在下進行。