[發明專利]一種用于定性檢測人宮頸脫落細胞中HPV感染的試劑盒

在審

• 申請號: 201811454635.3
• 申請日: 2018-11-30
• 公開（公告）號: CN109402298A
• 公開（公告）日: 2019-03-01
• 發明（設計）人: 董志強;王明璐;蕭錦華;楊呈勇
• 申請（專利權）人: 廣東騰飛基因科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京一格知識產權代理事務所(普通合伙) 11316
• 代理人: 趙永偉

本發明涉及一種用于檢測人宮頸脫落細胞中人乳頭瘤病毒核酸的試劑盒，包括用于檢測HPV6、11、16、18、26、31、33、35、39、40、42、43、44、45、51、52、53、54、56、58、59、61、66、68、70、72、73、81、82、89、83、67、55、84、34型等35個型別的一個或多個型別的檢測試劑。使用本發明的試劑盒可在同一個反應條件下同時對35個與HPV病毒相關基因的型別進行高通量檢測。檢測的特異性強，靈敏度高，最低檢測限為1ng/μL，用時短，從標本送檢到得出結果可在2小時以內完成。

技術領域

本發明涉及人乳頭瘤病毒(Human papillomavirus，HPV)核酸檢測領域，更特別地，涉及一種用于定性檢測人宮頸脫落細胞中HPV感染的試劑盒。

背景技術

人類乳頭瘤病毒(human papillomaviruses，HPV)感染與人類多種腫瘤特別是宮頸癌的發生、發展密切有關。而宮頸癌為女性最常見的癌癥之一，其發病率僅次于乳腺癌。全球每年新發病例約40萬且有超過20萬婦女死于該病。在發展中國家，由于宮頸癌篩查工作的不完善，其發生率是發達國家的6倍。近年，年輕宮頸癌患者有明顯上升趨勢，發病以每年2％～3％速度增長，對婦女的身心健康造成極大的危害。因此，對宮頸癌進行早期篩查的一項重要內容就是對HPV的檢測。

HPV是一種具有種屬特異性的嗜上皮病毒，屬雙鏈閉環的小DNA病毒。人類是HPV的唯一宿主，它定向感染人體皮膚及粘膜的復層鱗狀上皮內，具有高度的宿主特異親和力。

國際癌癥研究中心(IARC)專題討論會(1995年)明確提出，HPV感染是宮頸癌的主要病因。目前鑒定出HPV亞型100余種，其中30余種與宮頸感染和病變有關，根據其致病力的大小分為高危型和低危型兩種：將HPV6、11、40、42等歸為低危型，主要引起生殖道、肛周皮膚和陰道下部的外生殖性濕疣類病變、扁平濕疣類病變和低度子宮頸上皮內瘤變(CINI)；高危型主要為HPV 16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、73、82等，主要導致高度子宮頸上皮內瘤變(CINII、CINIII)和宮頸癌的發生在，，尤其是HPV16和18型。全球范圍的研究結果顯示，在99.7％的宮頸癌患者體內檢測到高危型人乳頭瘤病毒DNA的存其中HPV16、18、31、45型的感染占80％。因此，檢測出樣本中的具體HPV亞型對于宮頸癌的防治具有重要的指導意義。

長期以來，細胞學篩查是宮頸癌篩查的唯一或主要方式，近年來，HPV感染的檢查方法也由組織細胞水平發展到分子水平。

目前國內臨床主要的HPV檢測的常見方法包括測序法、雜交捕獲法、基因芯片法及熒光PCR法。測序法的結果相對準確，但操作繁瑣。雜交捕獲法如Digene公司的HybridCaptureII已在臨床上應用，但檢測時間長，一次實驗一般要5-6小時、靈敏度低、操作復雜、檢測基因型少且需要特定昂貴的儀器，成本高，也不適用于臨床。

熒光定量PCR(FQ-PCR)在常規PCR的基礎上把基因擴增、分子雜交和光化學融為一體，使PCR擴增和產物分析的全過程在單管封閉條件下進行，實現了實時動態檢測和結果自動化分析，從根本上解決了擴增產物污染和不能定量的問題。該方法通過探針雜交進一步提高了HPV DNA檢測的特異性，具有快速、簡便、靈敏度高、特異性強等優點，成本適中，幾乎不會造成污染，適用于臨床工作和大規模篩查。然而，目前該方法主要針對HPV6、11、16和18感染，易漏診其他HPV亞型，也不能明確區分多種型別。

因此，臨床上需要一種能一次性快速、準確檢測多種常見型別的HPV試劑盒。

發明內容