[發(fā)明專利]一種甘蔗組培苗種源的低溫保存方法以及培育方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811453475.0
• 申請日: 2018-11-30
• 公開（公告）號: CN109601378B
• 公開（公告）日: 2021-08-24
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 齊永文;樊麗娜;何慧怡;勞方業(yè)
• 申請（專利權(quán)）人: 廣東省生物工程研究所(廣州甘蔗糖業(yè)研究所)
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G22/55
• 代理公司: 北京超凡志成知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11371
• 代理人: 趙麗娜

1.一種甘蔗組培苗種源的低溫保存方法，其特征在于，包括以下步驟：叢生芽切割后在海藻酸鈉溶液中浸泡，然后將叢生芽塊，放入氯化鈣溶液中，利用海藻酸鈉與氯化鈣反應(yīng)生成的凝膠類物質(zhì)包埋叢生芽塊；

包埋的叢生芽塊進(jìn)行低溫保存即可；

所述海藻酸鈉溶液的質(zhì)量濃度為4%±0.5%；

叢生芽切割后在海藻酸鈉溶液中浸泡2~3min；

所述氯化鈣溶液的質(zhì)量濃度為2.5%±0.5%；

所述低溫保存的培養(yǎng)溫度為14~18℃，培養(yǎng)光照為800-1000 lx，光照時間10-12小時；

所述低溫保存的培養(yǎng)基以1/2 MS為溶劑，含有以下組分：6-芐氨基腺嘌呤0.20~0.80mg /L，多效唑0.02~0.1mg /L，蔗糖 10~20 g /L，瓊脂6~7g /L，pH為 5.8~6.2。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的甘蔗組培苗種源的低溫保存方法，其特征在于，凝膠類物質(zhì)包埋叢生芽塊后用無菌水沖洗3~4次，置于無菌紙上吸去表面水分，再進(jìn)行低溫保存。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的甘蔗組培苗種源的低溫保存方法，其特征在于，所述叢生芽采用以下方法制備：選取生長健壯、無病害的甘蔗植株，選取幼嫩生長力強(qiáng)的莖芽，切段留存單芽5~7厘米，用水清洗后，于52±2℃水浴2小時，取出后，32±2℃培養(yǎng)10~14天，選取健壯的幼芽，在無菌條件下，將外植體消毒后剝至生長點(diǎn)，進(jìn)行叢生芽增殖。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的甘蔗組培苗種源的低溫保存方法，其特征在于，所述叢生芽增殖的培養(yǎng)條件：溫度28~31℃，光照強(qiáng)度1800~2100 lx，光照時間15-17小時/天；

接種到腋芽啟動培養(yǎng)基中進(jìn)行叢生芽增殖，所述腋芽啟動培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)液為溶劑，含有以下組分：6-芐氨基腺嘌呤1.0~2.0 mg/L、吲哚丁酸 0.2~0.6 mg/L、蔗糖20~30 g/L、瓊脂 5.5 ~ 7 g /L，pH為 5.8~6.2。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的甘蔗組培苗種源的低溫保存方法，其特征在于，所述腋芽啟動培養(yǎng)基上進(jìn)行叢生芽增殖到第2~3代時，每個外植體有3~5個芽，取樣3~4個進(jìn)行“花葉病”的病毒免疫學(xué)檢測，檢測無病菌的株系用于種源低溫保存。

6.一種甘蔗組培苗種源的培育方法，其特征在于，權(quán)利要求1-5任一項所述的甘蔗組培苗種源的低溫保存方法得到的甘蔗組培苗種源轉(zhuǎn)接到恢復(fù)生長培養(yǎng)基中培養(yǎng)15~20天時，將恢復(fù)生長的包埋體接種到新的恢復(fù)生長培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖快繁，獲得叢生芽；

所述恢復(fù)生長培養(yǎng)基中的培養(yǎng)條件：溫度26~31℃，光照強(qiáng)度1800~2100 lx，光照時間15-17小時/天；

所述恢復(fù)生長培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)液為溶劑，含有以下組分： 6-芐氨基腺嘌呤1.0~2.0 mg/L、吲哚丁酸 0.2~0.6 mg /L、蔗糖20~30 g /L、瓊脂 5.5 ~ 7 g /L， pH為 5.8~6.2；

所述叢生芽經(jīng)生根培養(yǎng)得到試管苗，所述生根培養(yǎng)步驟為：獲得的叢生芽切成帶有2~3個芽的叢生芽，轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中生根培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度28~31℃，光照度1800~2100 lx ，光照時間15-17小時/天，直至長成試管苗。