[發(fā)明專利]一種液質(zhì)聯(lián)用測定血漿中卡馬西平濃度的方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201811450999.4 | 申請日： | 2018-11-30 |
| 公開（公告）號： | CN109541107A | 公開（公告）日： | 2019-03-29 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 林明弘 | 申請（專利權(quán)）人： | 徐州佳生醫(yī)藥科技有限公司 |
| 主分類號： | G01N30/88 | 分類號： | G01N30/88;G01N30/06 |
| 代理公司： | 徐州市淮海專利事務(wù)所 32205 | 代理人： | 李妮 |
| 地址： | 221000 江蘇省徐州市泉山*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 卡馬西平 血漿 聯(lián)用 種液 預(yù)處理 混合有機(jī)溶劑 血藥濃度測定 液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng) 色譜柱分離 質(zhì)譜檢測器 待測樣品 曲線線性 血漿標(biāo)準(zhǔn) 靈敏度 萃取 檢測 | ||
1.一種液質(zhì)聯(lián)用測定血漿中卡馬西平濃度的方法，其特征在于：血漿樣品經(jīng)預(yù)處理后經(jīng)高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測其濃度，具體方法包括以下步驟：
(1)血漿樣品預(yù)處理：
血漿以K2EDTA為抗凝劑，以奧昔布寧為內(nèi)標(biāo)；于96深孔板中精密加入50uL的血漿樣品，加入2.5uL的體積比為1：1的乙腈水溶液，混勻后加入5uL的1ng/uL的內(nèi)標(biāo)奧昔布寧溶液，混勻后加入1000uL乙腈于96深孔板中，渦旋混合1min，于20℃以3000rpm離心10min，取上層清液50uL至裝有1000uL混合有機(jī)溶劑的96深孔板中，混合有機(jī)溶液為水：乙腈：甲酸按照體積比70：30：0.2混合得到的混合物，渦旋混勻，于20℃以3000rpm離心5min后作為測試樣品待檢測；
(2)試樣測定：
取10uL測試樣品注入高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀中，檢測樣品中卡馬西平和內(nèi)標(biāo)奧昔布寧的色譜峰，并據(jù)此計算所述血漿樣品中的卡馬西平濃度；
(3)液相色譜測定，條件為：
色譜柱：Agilent ZORBAX XDB-C18，5um，柱規(guī)格為50×2.1mm；色譜柱溫：40℃；流動相A：水/甲酸的體積百分比為100/0.2；流動相B：乙腈/甲酸的體積百分比為100/0.2；洗液：乙腈/水的體積百分比為50/50；自動進(jìn)樣器溫度為15℃；梯度洗脫，流速為0.4mL/min，進(jìn)樣量為10uL，分析時間3.5min；
(4)質(zhì)譜測定，條件為：
離子源為電噴霧離子源，噴霧電壓為5000V，霧化溫度為500℃，噴霧氣壓力為20Psi，輔助加熱氣壓力為20Psi，氣簾氣壓力為20Psi，碰撞氣壓力為8Psi，去簇電壓分別為30eV的卡馬西平和奧昔布寧；碰撞室入口電壓分別為10eV的卡馬西平和奧昔布寧；碰撞電壓分別為30eV的卡馬西平和奧昔布寧；碰撞室出口電壓分別為10eV的卡馬西平和8eV的奧昔布寧；正離子方式檢測；掃描方式為多重反應(yīng)監(jiān)測；
用于定量分析的離子反應(yīng)分別為：m/z237.1→m/z194.2，其為卡馬西平；和m/z358.2→m/z142.3，其為奧昔布寧。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種液質(zhì)聯(lián)用測定血漿中卡馬西平濃度的方法，其特征在于：所述步驟(3)中梯度洗脫的程序為：
。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種液質(zhì)聯(lián)用測定血漿中卡馬西平濃度的方法，其特征在于：所述步驟(2)中，采用內(nèi)標(biāo)法，以卡馬西平和內(nèi)標(biāo)奧昔布寧的峰面積比值帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計算所述血漿樣品中的卡馬西平的濃度。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種液質(zhì)聯(lián)用測定血漿中卡馬西平濃度的方法，其特征在于：所述標(biāo)準(zhǔn)曲線方程的建立包括以下步驟：
取50uL空白血漿10份置于96深孔板中，以貯備液的形式分別添加2.5uL濃度分別為0.1ng/μL、0.2ng/μL、0.4ng/μL、1ng/μL、2ng/μL、8ng/μL、12ng/μL、20ng/μL的卡馬西平溶液至最低定量下限樣本、標(biāo)樣1、標(biāo)樣2、標(biāo)樣3、標(biāo)樣4、標(biāo)樣5、標(biāo)樣6、最高定量上限樣本中，分別添加2.5uL體積分?jǐn)?shù)為50％的乙腈水溶液至空白樣本和零濃度樣本，混勻后分別向最低定量下限樣本、標(biāo)樣1、標(biāo)樣2、標(biāo)樣3、標(biāo)樣4、標(biāo)樣5、標(biāo)樣6、最高定量上限樣本、零濃度樣本中加入5uL的1ng/uL的內(nèi)標(biāo)奧昔布寧溶液，向空白樣本中加入5uL體積分?jǐn)?shù)為50％的乙腈水溶液，混勻后分別向10份樣本中加入1000uL乙腈于96深孔板中，渦旋混合1min，于20℃以3000rpm離心10min，取上層清液50uL至裝有1000uL混合有機(jī)溶劑的96深孔板中，混合有機(jī)溶液為水：乙腈：甲酸按照體積比70：30：0.2混合得到的混合物，渦旋混勻，于20℃以3000rpm離心5min后分別作為10份標(biāo)準(zhǔn)樣品待檢測；
分別取10uL標(biāo)準(zhǔn)樣品注入高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀中，檢測樣品中的卡馬西平和內(nèi)標(biāo)奧昔布寧的色譜峰，并據(jù)此得到標(biāo)準(zhǔn)曲線，以用于計算所述血漿中的卡馬西平的濃度。
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