[發明專利]一種腫瘤靶向藥物及其制備方法

在審

• 申請號: 201811450152.6
• 申請日: 2018-11-30
• 公開（公告）號: CN109529044A
• 公開（公告）日: 2019-03-29
• 發明（設計）人: 王云龍;方蕊;李玉林;王繼創;張怡青;鄧黎黎
• 申請（專利權）人: 河南省生物工程技術研究中心有限公司;河南省生物工程技術研究中心
• 主分類號: A61K47/42
• 分類號: A61K47/42;A61K45/00;A61P35/00;C12N15/62;C12N15/70;C07K19/00
• 代理公司: 鄭州銘晟知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 41134
• 代理人: 張鵬

本發明涉及靶向藥物遞送領域，具體涉及一種腫瘤靶向藥物及其制備方法。該腫瘤靶向藥物，包括靶向載體和裝載于所述載體的抗腫瘤藥，所述靶向載體為包括乙肝病毒樣顆粒和RGD序列的重組蛋白。本發明的腫瘤靶向藥物可通過基因工程的方法獲得，操作簡單。本發明的腫瘤靶向藥物靶向性好、生物利用度高、副作用小。

技術領域

本發明涉及靶向藥物遞送領域，具體涉及一種腫瘤靶向藥物及其制備方法。

背景技術

靶向藥物是當前抗腫瘤藥物研究的熱點，目前常見的小分子靶向藥物大多通過將小分子藥物與蛋白類納米載體或高分子納米載體通過化學修飾得到，制備過程復雜，且高分子納米載體的生物相容性差，可能會對體內正常細胞造成影響。

乙肝核心蛋白病毒樣顆粒是不含病毒核酸的空殼結構，許多病毒結構蛋白都具有自動組裝成VLPs的能力，在形態結構上與天然的病毒顆粒相似，具有很強的免疫原性和生物學活性。由于VLPs不含有病毒遺傳物質，因此不具有感染性，其中有些已經作為疫苗成功應用于臨床。VLPs在結構上允許外源基因或基因片段的插入而形成嵌合型VLPs并將外源性抗原展示在其表面。

乙肝病毒核心抗原(HBcAg)在1987年被第一次用作外源抗原病毒樣顆粒載體。用于HBcAg表達的表達系統具有多樣化，包括原核表達系統、哺乳動物細胞表達系統、轉基因植物表達系統、酵母表達系統、昆蟲細胞表達系統等，并且都能達到較高產量，形成天然顆粒狀結構。

由大腸桿菌表達系統表達產生的HBcAg主要有兩種顆粒大小，一種包括180個亞基(T＝3，T＝Triangulation number)，另外一種包括240個亞基(T＝4)，部分顆粒中包裹大腸桿菌核酸。每個形成顆粒的亞基都是由HBcAg單體形成的二聚體，構成顆粒外部的刺突。兩個HBcAg單體通過二硫鍵形成一個亞基，每個HBcAg單體有4個Cys殘基，包括Cys48、Cys61、Cys107、Cys183。其中Cys107包裹在顆粒內部；Cys48部分參與單體間二硫鍵形成，剩下的殘基游離在顆粒表面；而Cys61和Cys183則全部參與單體間或二聚體之間二硫鍵形成，和野生型的HBcAg具有同樣的結合方式。對于全長183個氨基酸的HBcAg來說，前144個氨基酸屬于顆粒裝配區，主要功能和病毒顆粒狀形成有關。而第145～183個氨基酸屬于核酸結合區富含精氨酸，具有三個重復的SPRRR結構，主要作用是結合病毒核酸并將其包裹至病毒顆粒內部對病毒核酸起到保護和提供復制場所的功能。HBcAg氨基酸序列中第78～82個氨基酸之間是主要免疫區域(Major Immunodominant Region，MIR)，這個區域呈現在顆粒表面刺突的頂部；第127～133個氨基酸在主要刺突旁邊形成一個小的刺突，這兩部分為HBcAg表面的主要B細胞識別位點。

MIR區域由于分布在顆粒表面的刺突頂部，具有易于與受體結合和不影響外源片段自然構象的優點。對于HBcAg單體的N末端和C末端而言，插入片段時需要考慮是否呈現在顆粒表面、是否影響顆粒結構組裝和插入片段是夠能保持天然構象這三方面問題。C末端在144個氨基酸之后插入小片段序列不會影響顆粒自組裝，但是插入片段的大小對插入片段是否能正確折疊和是夠能呈現在顆粒表面有很大影響。N末段插入外源序列要保持序列正確構象和顆粒表面呈現比較困難，所以對插入片段大小有嚴格的限制。用結構比較松散的截短型即前144個氨基酸形成的顆粒，可以提高N末端插入片段呈現在顆粒表面的可能性。

發明內容

為解決上述問題，本發明提供一種更易被腫瘤細胞攝取、生物相容性好的腫瘤靶向藥物。本發明還提供了一種更加高效、簡單的腫瘤靶向藥物的制備方法。

本發明的腫瘤靶向藥物采用如下技術方案：一種腫瘤靶向藥物，包括靶向載體和裝載于所述載體的抗腫瘤藥，所述靶向載體為包括乙肝病毒樣顆粒和RGD序列的重組蛋白。

優選的，所述乙肝病毒樣顆粒包括144個氨基酸，其C端的第78-82位氨基酸用RGD序列替代，所述RGD序列兩端分別通過連接肽與所述乙肝病毒樣顆粒C端的第77和83位氨基酸相連。