[發明專利]一株缺失E蛋白離子通道活性的傳染性支氣管炎重組病毒及制備方法與應用

有效

• 申請號: 201811449640.5
• 申請日: 2018-11-30
• 公開（公告）號: CN109517809B
• 公開（公告）日: 2022-03-22
• 發明（設計）人: 馮濤聲;劉定祥;陳瑞愛;李淑敏;李延鵬;梁佳琪;袁麗霞;朱慶春;羅瓊;熊挺
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/50;C12N15/63
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 蘇運貞

本發明公開了一株缺失E蛋白離子通道活性的傳染性支氣管炎重組病毒及制備方法與應用。本發明將野生型傳染性支氣管炎病毒的E蛋白的第26位氨基酸由丙氨酸突變為苯丙氨酸，得到的缺失E蛋白離子通道活性的傳染性支氣管炎重組病毒。本發明通過構建缺失E蛋白離子通道活性的傳染性支氣管炎重組病毒，以及獲得了回復突變體，對突變后的病毒進行分離純化方法及其特性分析，有助于開發特異性的抗病毒藥物和預防病毒感染的有效疫苗，對冠狀病毒的研究具有重大的公共衛生和經濟意義。

技術領域

本發明屬于分子生物學領域，特別涉及一株缺失E蛋白離子通道活性的傳染性支氣管炎重組病毒及制備方法與應用。

背景技術

雞的傳染性支氣管炎病毒是一種冠狀病毒，在1937年首次被分離出，這種冠狀病毒對全世界家禽產業造成重大經濟損失。冠狀病毒具有高度的傳染性，造成呼吸道、腎臟和輸卵管疾病的發生，引起機體體重變輕，腎臟出現故障，產蛋數量和質量下降。相關研究表明冠狀病毒可以跨越物種屏障并成為致命的人畜共患病的病原體。目前，對冠狀病毒感染無有效的治療手段，開發減毒疫苗和特異性抗病毒藥物是有前途的戰略。

E蛋白是冠狀病毒致病性的關鍵，它是一種小蛋白(76～109個氨基酸，約8～10kDa)，在感染細胞和成熟病毒體中含量較低的結構蛋白，對于冠狀病毒的組裝起到關鍵作用。在某些冠狀病毒中，敲除E基因的重組病毒仍能保持復制能力，但其形成病毒體的形態具有嚴重缺陷，且滴度出現顯著下降，例如在SARS-CoV中使缺失E蛋白，減少致病性和死亡數，而重組SARS-CoV缺乏E基因導致了細胞凋亡增加，下調了感染細胞相關的炎癥因子。

發明內容

本發明的首要目的在于克服現有技術的缺點與不足，提供一株缺失E蛋白離子通道活性的傳染性支氣管炎重組病毒，以供研究IBV E蛋白離子通道活性缺失對E蛋白的結構、病毒增殖能力、形成病毒空斑的大小及其對細胞凋亡的影響，判斷病毒的復制能力和致病力是否發生改變，并且為研制IBV減毒疫苗提供了參考方法。

本發明的另一目的在于提供上述缺失E蛋白離子通道活性的傳染性支氣管炎重組病毒的制備方法。

本發明的再一目的在于提供上述缺失E蛋白離子通道活性的傳染性支氣管炎重組病毒的應用。

本發明的目的通過下述技術方案實現：

一株缺失E蛋白離子通道活性的傳染性支氣管炎重組病毒，是將野生型傳染性支氣管炎病毒的E蛋白的第26位氨基酸由丙氨酸A突變為苯丙氨酸F，得到的缺失E蛋白離子通道活性的傳染性支氣管炎重組病毒。

所述的野生型傳染性支氣管炎病毒的E蛋白的氨基酸序列如下：

MNLLNKSLEENGSFLTALYIIVGFLALYLLGRALQAFVQAADACCLFWYTWVVIPGAKGTAFVYKYTYGRKINNPELEAVIVNEFPKNGWNNKNPANFQDVQRDKLYS。

編碼所述的野生型傳染性支氣管炎病毒的E蛋白的核苷酸序列如下：

ATGAATTTATTGAATAAGTCGCTAGAGGAGAATGGAAGTTTTCTAACAGCGCTTTACATAATTGTAGGATTTTTAGCACTTTATCTTCTAGGTAGAGCACTTCAAGCATTTGTACAGGCTGCTGATGCTTGTTGTTTATTTTGGTATACATGGGTAGTAATTCCAGGAGCTAAGGGTACAGCCTTTGTATACAAGTATACATATGGTAGAAAAATTAACAATCCGGAATTAGAAGCAGTTATTGTTAACGAGTTTCCTAAGAACGGTTGGAATAATAAAAATCCAGCAAATTTTCAAGATGTCCAACGAGACAAATTGTACTCTTGA。

所述的缺失E蛋白離子通道活性的傳染性支氣管炎重組病毒的E蛋白的氨基酸序列如下：