[發明專利]利用p5126-ZmMs1M構建體創制玉米顯性核雄性不育系及其育種制種應用方法

有效

• 申請號: 201811449084.1
• 申請日: 2018-11-30
• 公開（公告）號: CN109504701B
• 公開（公告）日: 2020-09-01
• 發明（設計）人: 萬向元;吳鎖偉;張丹鳳;謝科;董振營;張煜文;鮑建喜;安學麗;劉欣潔;李金萍
• 申請（專利權）人: 北京首佳利華科技有限公司
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;C12N15/65;C12N5/10;A01H1/02;A01H1/04;A01H5/00;A01H5/10;A01H6/46
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1.一種構建體在使轉基因玉米表現顯性核雄性不育的應用，其特征在于，該構建體由三種類型基因表達盒組成：（a）第一種表達盒，為導致玉米顯性核雄性不育的基因表達盒；（b）第二種表達盒，為標記玉米種皮顏色的表達盒；（c）第三種表達盒，為除草劑抗性基因表達盒；其中，導致玉米顯性核雄性不育的基因表達盒由花粉特異表達的玉米5126 啟動子、雄花發育基因ZmMs1基因和農桿菌章魚堿合酶Ocs基因的終止子可操作地相連，其序列如SEQ ID NO .1所示；標記玉米種皮顏色的表達盒由玉米種皮特異表達的Ltp2啟動子、玉米種皮顏色標記基因即紅色熒光基因mCherry和胭脂堿合成酶基因Nos終止子可操作地相連，其序列如SEQ ID NO .2所示；除草劑抗性基因的表達盒由花椰菜花葉病毒CaMV的35S啟動子、除草劑抗性基因BAR和花椰菜花葉病毒的35S polyA終止子可操作地相連，其序列如SEQID NO.3所示，利用該構建體轉化玉米，導致轉基因玉米具有顯性核雄性不育的功能，所述轉化玉米的受體材料為可遺傳轉化的玉米自交系。

2.一種創制玉米顯性核雄性不育植株和繁殖玉米顯性核雄性不育種子的方法，包括：（a）提供第一植株，該植株是一種可用于遺傳轉化的玉米自交系材料；（b）創制第二植株，所述第二植株是向上述第一植株中引入顯性核雄性不育構建體，且所述構建體只存在于玉米同源染色體的其中一條染色體上，即所述構建體為半合子狀態，該植株表現為不依賴于其背景基因型的顯性核雄性不育，（c）用所述第一植株的雄性配子給所述第二植株受精，產生的種子中有50%的基因型同第二植株，即所述構建體為半合子狀態的顯性核雄性不育種子，另外50%為非轉基因的正常可育保持系種子；所述構建體由三種類型基因表達盒組成：（a）第一種表達盒，為導致玉米顯性核雄性不育的基因表達盒；（b）第二種表達盒，為標記玉米種皮顏色的表達盒；（c）第三種表達盒，為除草劑抗性基因表達盒；其中，導致玉米顯性核雄性不育的基因表達盒由花粉特異表達的玉米5126啟動子、雄花發育基因ZmMs1基因和農桿菌章魚堿合酶Ocs基因的終止子可操作地相連，其序列如SEQ ID NO .1所示；標記玉米種皮顏色的表達盒由玉米種皮特異表達的Ltp2啟動子、玉米種皮顏色標記基因即紅色熒光基因mCherry和胭脂堿合成酶基因Nos終止子可操作地相連，其序列如SEQ ID NO .2所示；除草劑抗性基因的表達盒由花椰菜花葉病毒CaMV的35S啟動子、除草劑抗性基因BAR和花椰菜花葉病毒的35S polyA終止子可操作地相連，其序列如SEQ ID NO.3所示。

3.根據權利要求2所述的方法，其還包括鑒定具有所述構建體的植株的方法，具體為：（1）種植權利要求2中所述的顯性核雄性不育種子；（2）使所述種子長成待鑒定植株；（3）用權利要求2中所述的除草劑抗性基因對應的除草劑噴灑所述待鑒定植株，具有所述構建體的植株與不含所述構建體的植株相比，沒有植物損傷癥狀或具有的損傷癥狀程度更輕。

4.根據權利要求2所述的方法，其還包括鑒定具有所述構建體的種子的方法，具體為：權利要求2中所述步驟(c)產生的種子，在正常光下直接觀察，全部是正常顏色種子；在綠色激發光下通過熒光濾鏡觀察，50%具有紅色熒光的種子，即為含有所述構建體的顯性核雄性不育系種子。