[發明專利]胃蛋白酶原Ⅱ檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201811446772.2
• 申請日: 2018-11-29
• 公開（公告）號: CN109307765A
• 公開（公告）日: 2019-02-05
• 發明（設計）人: 馬雷;史小芹;渠文濤;劉雅奇;周金龍;田會會;李曉霞;喬曉芳;付光宇;吳學煒
• 申請（專利權）人: 鄭州安圖生物工程股份有限公司
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/573;G01N33/535;G01N33/68;G01N21/76
• 代理公司: 鄭州異開專利事務所(普通合伙) 41114
• 代理人: 王霞

本發明公開了一種胃蛋白酶原Ⅱ檢測試劑盒，包括包被有胃蛋白酶原Ⅱ單克隆抗體的磁微粒，含有辣根過氧化物酶（HRP）標記胃蛋白酶原Ⅱ單克隆抗體的酶稀釋液，含有胃蛋白酶原Ⅱ抗原的校準品及樣品稀釋液；所述樣品稀釋液中含有阻斷劑成分；所述阻斷劑為一種或多種中和HAMA干擾的人抗鼠抗體。本發明的優點在于將高靈敏度的化學發光技術和磁微粒制備技術相結合，配套使用AutoLumo全自動檢測分析儀，實現了檢測全自動化；同時在樣品稀釋液中添加了阻斷劑成分，可消除樣本中嗜異性抗體，大大提高了試劑盒的抗干擾能力。

技術領域

本發明涉及生物檢測技術，尤其是涉及一種胃蛋白酶原Ⅱ檢測試劑盒。

背景技術

胃蛋白酶原(PG)是胃液中胃蛋白酶(蛋白水解酶)的無活性前體，為由375個氨基酸組成的蛋白多肽鏈，平均相對分子質量為42000 Da，人胃黏膜中有7組胃蛋白酶同工酶原。 根據生化性質、免疫原性、細胞來源及組織內分布可分為胃蛋白酶原Ⅰ（PGⅠ）、胃蛋白酶原Ⅱ（PGⅡ）兩個亞群，1-5組分免疫原性近似，稱為PGⅠ，主要由胃底腺的主細胞的黏液頸細胞分泌；組分6-7被稱為PGⅡ，除由胃體和胃底粘膜的泌酸腺的主細胞分泌外，泌酸腺的黏液頸細胞、賁門腺和胃竇的幽門腺的黏液細胞以及十二指腸上段的Brunner腺也能產生PGⅡ，胃黏膜合成的PGⅡ約為總量的25％。胃幾乎是PG的惟一來源，合成后的PG大部分進入胃腔，在酸性胃液作用下活化成胃蛋白酶原，只有少量PG(約1％)透過胃黏膜毛細血管進入血液循環，故血清PGⅠ和 PGⅡ反映了胃黏膜不同部位的分泌功能。當胃黏膜發生病理變化時，血清PG含量也隨之發生改變。胃液和血清PG水平與活組織病理變化結果常一致，因此，監測血清中PG的濃度可以作為監測胃黏膜狀態的手段。胃底腺黏膜萎縮的過程中，分泌PGⅠ的主細胞減少，幽門腺細胞增多，從而造成PGⅠ和PGⅡ的比值降低。因此PGⅠ和PGⅡ的比值可以作為胃底腺黏膜萎縮的指征，免疫學方法檢測PGⅠ和PGⅡ水平并結合PGⅠ和PGⅡ的比值可用于篩查胃底腺黏膜萎縮性疾病，如胃炎、胃癌等等有關。

現有技術中，PGⅡ的檢測方法包括酶聯免疫吸附測定(ELISA)、免疫比濁法、 化學發光免疫分析法(CLIA)等。酶聯免疫吸附測定方法操作過程復雜，測定時間較長，影響因素多，且不適合急診樣本的檢測；免疫比濁法測定，抗原或抗體量過大時，可出現可溶性復合物，造成誤差，易受脂血影響。化學發光免疫分析法雖具有反應時間短等多項優點，但抗干擾等性能較低，這是由于目前免疫檢測試劑盒所用的抗體大多數來源于實驗動物，嗜異性抗體可與多種動物的免疫球蛋白的Fc和Fab表位發生非特異性結合，從而干擾檢測結果出現假陽或漏檢。

發明內容

本發明的目的在于提供一種胃蛋白酶原Ⅱ檢測試劑盒，可大大提高其抗干擾能力。

為實現上述目的，本發明可采取下述技術方案：

本發明所述的胃蛋白酶原Ⅱ檢測試劑盒，包括包被有胃蛋白酶原Ⅱ單克隆抗體的磁微粒，含有辣根過氧化物酶（HRP）標記胃蛋白酶原Ⅱ單克隆抗體的酶稀釋液，含有胃蛋白酶原Ⅱ抗原的校準品及樣品稀釋液；所述樣品稀釋液中含有阻斷劑成分；所述阻斷劑為一種或多種中和HAMA干擾的人抗鼠抗體。

所述樣品稀釋液的配方組成為緩沖液0.01~0.2 mol/L，防腐劑0.1%~0.5%（w/v），保護蛋白1%~10%（w/v），EDTA 1%~10%（w/v），阻斷劑200~500 ng/mL，色素0.001%（g/v）。

所述EDTA為乙二胺四乙酸二鈉或/和乙二胺四乙酸二鉀。

本發明中包被有胃蛋白酶原Ⅱ單克隆抗體的磁微粒，含有辣根過氧化物酶標記胃蛋白酶原Ⅱ單克隆抗體的酶稀釋液，含有胃蛋白酶原Ⅱ抗原的校準品及樣品稀釋液四個組分中所用的稀釋液為PBS、MES、MOPS中的任一種，其pH=6.0～8.0。

所述稀釋液中的保護蛋白為牛血清白蛋白、牛血清、酪蛋白中的一種或兩種。所述稀釋液中的防腐劑為P300、Bro、MIT、NaN₃的任意組合。