[發明專利]一種西蘭花蛋白來源的ACE抑制肽、ACE抑制肽酶切代謝產物及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201811444501.3
• 申請日: 2018-11-29
• 公開（公告）號: CN109517035B
• 公開（公告）日: 2021-10-19
• 發明（設計）人: 黨亞麗;潘道東;高新昌;周亭屹;郝麗;曹錦軒
• 申請（專利權）人: 寧波大學
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K5/083;C07K5/062;C07K1/16;C12P21/06;A23L33/18;A23L33/00
• 代理公司: 寧波奧圣專利代理有限公司 33226
• 代理人: 何仲

1.一種西蘭花蛋白來源的ACE抑制肽酶切代謝產物，其特征在于：所述的ACE抑制肽酶切代謝產物為ACE抑制肽經胃蛋白酶和胰蛋白酶消化酶解所得，其氨基酸序列為Leu-Val-Leu-Pro-Gly-Glu-Leu，Leu-Val-Leu-Pro-Gly-Glu，Leu-Ala-Lys和Ala-Lys，所述的ACE抑制肽氨基酸序列為Leu-Val-Leu-Pro-Gly-Glu-Leu-Ala-Lys。

2.一種權利要求1所述的西蘭花蛋白來源的ACE抑制肽酶切代謝產物的制備方法，其特征在于步驟如下：

（1）以西蘭花新鮮莖葉為原料進行壓榨，將所得汁液加熱到85-95℃，保溫8-12min，沉淀物經離心，干燥，即得西蘭花蛋白粗提物；

（2）西蘭花莖葉中多肽提取物的酶法制備

以西蘭花蛋白粗提物為原料，按料液質量比1：15-25加入蒸餾水，在溫度55-65℃、pH8.0條件下，加入西蘭花蛋白粗提物質量1.5-2.5%的Aclase堿性蛋白酶，酶解3h后，滅酶，冷卻，并經離心，旋轉蒸發，濃縮后冷凍干燥，得到西蘭花多肽提取物；

（3）西蘭花多肽提取物超濾和凝膠過濾

將西蘭花多肽提取物采用Valflow 50超濾，然后用G-15凝膠柱分離，洗脫條件為：洗脫液為去離子水，流速13-17mL/h，上樣量90-110mg，收集三個西蘭花小肽分離組分，經過濾，干燥測定ACE抑制活性；

（4）西蘭花多肽提取物的高效液相色譜分離純化

將凝膠過濾后得到的ACE抑制活性最強的組分，進一步進行液相分離，色譜條件：色譜柱CAPCELL PAK C18 AQ S-5，柱溫30℃，流動相A：水+0.2%甲酸，流動相B：乙腈，洗脫方式：梯度洗脫，0-30min流動相A:100%-92.5%，流動相B：0-7.5%；30-33min流動相A：92.5%-15%，流動相B：7.5%-85%；33-43min流動相A：15%，流動相B：85%；43-45min流動相A：15%-100%，流動相B 85%-0%；45-55min流動相A：100%，流動相B 0%，流速1.0 ml/min，檢測波長：280nm，進樣體積100uL，收集四個西蘭花小肽分離組分，干燥測定ACE抑制活性；

（5）ACE抑制肽的結構鑒定

采用質譜對液相分離得到的ACE抑制活性最強的峰進行分析，鑒定ACE抑制肽的結構，獲得其氨基酸序列為Leu-Val-Leu-Pro-Gly-Glu-Leu-Ala-Lys；

（6）ACE抑制肽胃腸道酶切代謝后肽段鑒定

將步驟（5）得到的ACE抑制肽依次用胃蛋白酶和胰蛋白酶酶切消化得到ACE抑制肽酶切代謝產物，鑒定ACE抑制肽酶切代謝產物獲得其氨基酸序列為Leu-Val-Leu-Pro-Gly-Glu-Leu，Leu-Val-Leu-Pro-Gly-Glu，Leu-Ala-Lys和Ala-Lys。

3.根據權利要求2所述的西蘭花蛋白來源的ACE抑制肽酶切代謝產物的制備方法，其特征在于：步驟（6）中所述的胃蛋白酶與所述的ACE抑制肽的質量為 1∶100，所述的胰蛋白酶與所述的ACE抑制肽的質量比為1∶50。

4.根據權利要求1所述的西蘭花蛋白來源的ACE抑制肽酶切代謝產物在制備輔助降血壓食品或降壓藥品方面的應用。