[發(fā)明專利]一種構(gòu)建PRMT7高表達(dá)的細(xì)胞系的方法及細(xì)胞系

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201811442896.3
• 申請日: 2018-11-29
• 公開（公告）號: CN111235182A
• 公開（公告）日: 2020-06-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉揚;耿鵬宇
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N5/10;C12R1/91
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標(biāo)代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

本發(fā)明公開一種外源重組質(zhì)粒pCDH?puro?PRMT7穩(wěn)定過表達(dá)的乳腺癌MCF7細(xì)胞系的構(gòu)建方法。具體經(jīng)過PRMT7基因全長的獲得，pCDH?puro?PRMT7質(zhì)粒構(gòu)建、包裝病毒，病毒侵染細(xì)胞，而后嘌呤霉素篩選，擴增后獲得PRMT7穩(wěn)定過表達(dá)的MCF7細(xì)胞系。此細(xì)胞系的構(gòu)建有助于研究PRMT7的細(xì)胞生物學(xué)功能，如PRMT7對小鼠成瘤能力的影響；對小鼠肺轉(zhuǎn)移能力的影響等等。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種PRMT7高表達(dá)的乳腺癌細(xì)胞系的構(gòu)建。

技術(shù)背景

乳腺癌是婦女最常見的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅婦女生命。在我國，乳腺癌的年發(fā)病率呈逐年上升趨勢。雖然早期診斷和治療措施得以改善，但未能明顯減少乳腺癌病人的死亡率。因此對乳腺癌腫瘤發(fā)生機制的探索一直是科研工作者研究的焦點，對于提高腫瘤的診斷和治療水平具有重要意義。

精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶(Protein Arginine Methyltransferases，PRMTs)是一種依賴于甲基供體的精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶，催化甲基基團(tuán)從S-腺苷甲硫氨酸(SAM)轉(zhuǎn)移到靶蛋白精氨酸胍基的氮原子上，導(dǎo)致甲基精氨酸和S-腺苷高半胱氨酸的形成。精氨酸甲基化修飾分為4種類型，ω-aDMA：將兩個S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine，SAM)轉(zhuǎn)移到精氨酸胍基的一個末端氮原子上，催化非對稱二甲基化的形成；ω-sDMA：將兩個SAM轉(zhuǎn)移到精氨酸胍基的兩個末端氮原子上，催化對稱二甲基化的形成；ω-MMA：將一個SAM轉(zhuǎn)移到精氨酸胍基的一個末端氮原子上，催化單甲基化的形成；δ-MMA：將一個SAM轉(zhuǎn)移到精氨酸胍基的內(nèi)部氮原子上，催化單甲基化的形成。

PRMT7在核質(zhì)中均存在，含有兩個甲基轉(zhuǎn)移酶結(jié)構(gòu)域，可以對組蛋白H4R3和H2AR3進(jìn)行對稱二甲基化修飾(H4R3me2s、H2AR3me2s)，與基因的轉(zhuǎn)錄抑制相關(guān)，對組蛋白H3R2進(jìn)行對稱二甲基化修飾(H3R2me2s)，與基因的轉(zhuǎn)錄激活相關(guān)，一些非組蛋白也可被PRMT7甲基化修飾。有文獻(xiàn)報道PRMT7參與了多種生物學(xué)事件的發(fā)生。已有報道表明，精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶PRMT7在高惡性的乳腺癌細(xì)胞中高表達(dá)，能夠誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞發(fā)生EMT，促進(jìn)乳腺癌的轉(zhuǎn)移，在癌癥的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的旨在提供一種PRMT7高表達(dá)的MCF7細(xì)胞系的構(gòu)建方法。

本發(fā)明公開一種外源重組質(zhì)粒pCDH-puro-PRMT7穩(wěn)定過表達(dá)的乳腺癌MCF7細(xì)胞系的構(gòu)建方法。具體經(jīng)過PRMT7基因全長的獲得，pCDH-puro-PRMT7質(zhì)粒構(gòu)建、包裝病毒，病毒侵染細(xì)胞，而后嘌呤霉素篩選，擴增后獲得PRMT7穩(wěn)定過表達(dá)的MCF7細(xì)胞系。此細(xì)胞系的構(gòu)建有助于研究PRMT7的細(xì)胞生物學(xué)功能，如PRMT7對小鼠成瘤能力的影響；對小鼠肺轉(zhuǎn)移能力的影響等等。

附圖說明

圖1：為真核表達(dá)載體pCDH-EF1-MCS-puro。

圖2：為轉(zhuǎn)染空載體和PRMT7過表達(dá)質(zhì)粒，MCF7細(xì)胞中PRMT7的表達(dá)的western blot結(jié)果圖。

具體實施方式

現(xiàn)結(jié)合實例，對本發(fā)明做進(jìn)一步說明。實例僅限于說明本發(fā)明，而非對本發(fā)明的限定。

PRMT7編碼(CDS)序列：