[發明專利]適用于海州常山葉不同發育時期的熒光定量內參基因及其引物和應用

有效

• 申請號: 201811441231.0
• 申請日: 2018-11-28
• 公開（公告）號: CN109371155B
• 公開（公告）日: 2019-09-17
• 發明（設計）人: 華雅潔;楊秀蓮;施婷婷;岳遠征;歐陽綺霞;王良桂
• 申請（專利權）人: 南京林業大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 南京申云知識產權代理事務所(普通合伙) 32274
• 代理人: 邱興天

本發明公開了適用于海州常山葉不同發育時期的熒光定量內參基因及其引物和應用，該內參基因為Actin、RAN和SAND基因，其中，Actin基因的基因序列如SEQ ID NO.1所示，RAN基因的基因序列如SEQ ID NO.6所示，SAND基因的基因序列如SEQ ID NO.8所示。本申請依據現有公開的基因篩選出表達較為穩定的候選基因，通過軟件對其穩定性進行評估，獲得了適用于海州常山葉不同發育時期的熒光定量內參基因，并用這些基因為基礎設計了實時熒光定量PCR引物，填補了不同種源海州常山的不同葉期下沒有內參基因的現狀，為不同種源海州常山的不同葉期的相關功能基因的精確定量提供有力支持，可提高研究的穩定性、重復性和可靠性。

技術領域

本發明屬于植物分子生物學領域，具體涉及適用于海州常山葉不同發育時期的熒光定量內參基因及其引物和應用。

技術背景

海州常山(Clerodendrum trichotomum Thunb.)又名臭梧桐，馬鞭草科(Verbenaceae)大青屬(Clerodendmm L.)下落葉灌木或小喬木，是一種用途廣泛的食藥同源植物，具有抗旱、耐瘠薄、耐污染、耐鹽堿和抗病蟲害等特性，可用于廢棄地綠化、干旱瘠薄荒山及礦區廢棄地植被恢復與重建、是鹽堿地綠化的優良樹種。海州常山葉片較大，不僅可以食用，還可以作為藥材，可用于風濕痹痛、半身不遂、高血壓病、偏頭痛、瘧疾、痢疾、痔瘡、癰疽、瘡疥等。鹽城種源和泰安種源的海州常山對逆境抗性強，花期長，樹形優美，是值得開發于園林綠化的優良種源。而現在關于海州常山分子機理的研究還未曾有報道，據研究表明沒有一個內參基因在所有實驗條件下恒定表達，常用的內參基因在不同的植物及實驗條件下會表現不穩定的性狀，從而影響目的基因檢測的準確性，所以要開發海州常山葉片中的優良基因，必須確定穩定可靠的內參基因。

發明內容

發明目的：針對現有技術中存在的不足，本發明目的在于提供適用于海州常山葉不同發育時期的熒光定量內參基因，該基因能夠滿足實時熒光定量檢測海州常轉錄表達水平的要求，提高了海州常山基因表達分析研究的穩定性、可靠性和效率。本發明的另一目的是提供一種上述內參基因的專用引物。本發明還有一目的是提供一種上述內參基因或專用引物的應用。

技術方案：為了實現上述發明目的，本發明采用的技術方案為：

適用于海州常山葉不同發育時期的熒光定量內參基因，為Actin、RAN和SAND基因，其中，Actin基因的基因序列如SEQ ID NO.1所示，RAN基因的基因序列如SEQ ID NO.6所示，SAND基因的基因序列如SEQ ID NO.8所示。

所述的適用于海州常山葉不同發育時期的熒光定量內參基因的專用引物，SAND基因的引物序列如下：

SAND正向引物5’-CCACAACTAACGCCTCCACC-3’

SAND反向引物5’-AAATTCACCCTCCGACTCCC-3’。

所述的適用于海州常山葉不同發育時期的熒光定量內參基因的專用引物，RAN基因的引物序列如下：

RAN正向引物5’-CGATTCTTGCTTCCCTCAGTA-3’

RAN反向引物5’-ACCATTTTCGCCGCCTTA-3’。

所述的適用于海州常山葉不同發育時期的熒光定量內參基因的專用引物，Actin基因的引物序列如下：

Actin正向引物5’-CGATTCTTGCTTCCCTCAGTA-3’

Actin反向引物5’-ACCATTTTCGCCGCCTTA-3’。

所述的適用于海州常山葉不同發育時期的熒光定量內參基因的在海州常山葉熒光定量中的應用。

所述的SAND基因的引物序列的在海州常山葉熒光定量中的應用。