[發明專利]一種腫瘤標志物循環腫瘤DNA檢測芯片及試劑盒

在審

• 申請號: 201811441143.0
• 申請日: 2018-11-29
• 公開（公告）號: CN109337982A
• 公開（公告）日: 2019-02-15
• 發明（設計）人: 仰大勇;張杰;李敏;董宇航
• 申請（專利權）人: 天津大學
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6837;C12N15/11
• 代理公司: 天津一同創新知識產權代理事務所(普通合伙) 12231
• 代理人: 陸藝

1.一種腫瘤標志物循環腫瘤DNA檢測芯片，包括負載有納米金屬的基板，所述納米金屬與拉曼信號分子連接，拉曼信號分子通過連接分子與莖環結構探針連接。

2.根據權利要求1所述芯片，其特征是所述金屬為銀，金或銅。

3.根據權利要求1所述芯片，其特征是所述拉曼信號分子為活性羧基信號分子、羧基信號分子或氨基信號分子，所述活性羧基信號分子為5,5’-二硫代雙(琥珀酰亞氨基-2-硝基苯甲酸)；所述羧基信號分子為對巰基苯甲酸或2-硝基-5-巰基苯甲酸；所述氨基信號分子為對巰基苯胺或2-氨基-6-巰基嘌呤。

4.根據權利要求1所述芯片，其特征是所述連接分子為C3-C12的烷基氨基或C3-C12的烷基羧基。

5.根據權利要求1所述芯片，其特征是所述莖環結構探針是一條DNA-RNA嵌合體，所述DNA-RNA嵌合體分為1、2和3三個部分，第1部分和第3部分為5-7個脫氧核糖核苷酸組成的序列并反向互補配對構成莖環結構探針的莖，第2部分為莖環結構探針的環，所述環是由14-22個脫氧核糖核苷酸和1個核糖核苷酸組成的序列并能與目標待檢測物DNA堿基互補配對，所述莖環結構探針的環的位置有一個核糖核苷酸，其它位置為脫氧核糖核苷酸。

6.一種腫瘤標志物循環腫瘤DNA檢測芯片的制備方法，其特征是包括如下步驟：

1)制備負載有納米金屬的基板；

2)制備連接有連接分子的莖環結構探針：

(1)合成一條DNA-RNA嵌合體，所述DNA-RNA嵌合體分為1、2和3三個部分，第1部分和第3部分為5-7個脫氧核糖核苷酸組成的序列并能反向互補配對構成莖環結構探針的莖，第2部分為莖環結構探針的環，所述環由14-22個脫氧核糖核苷酸和1個核糖核苷酸組成的序列并能與目標待檢測物DNA堿基互補配對；在所述DNA-RNA嵌合體的5’端或3’端連接上連接分子；

(2)將步驟(1)獲得的連接有連接分子的DNA-RNA嵌合體配成濃度為10nM-100uM的水溶液，加入NaCl使終濃度為50-100mM，混勻，置于PCR儀中，升溫至95-90℃，在0.5-2小時內降溫到25-4℃，得到連接有連接分子的莖環結構探針；

3)將拉曼信號分子配成拉曼信號分子溶液，將負載有納米金屬的基板浸泡于拉曼信號分子溶液中，浸泡2-12h，使納米金屬與拉曼信號分子連接；

4)將步驟3)獲得的產物與連接有連接分子的莖環結構探針中的連接分子連接，得到一種腫瘤標志物循環腫瘤DNA檢測芯片。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征是所述金屬為銀，金或銅。

8.根據權利要求6所述的方法，其特征是所述連接分子為C3-C12的烷基氨基或C3-C12的烷基羧基。

9.根據權利要求6所述的方法，其特征是所述拉曼信號分子為活性羧基信號分子、羧基信號分子或氨基信號分子，所述活性羧基信號分子為5,5’-二硫代雙(琥珀酰亞氨基-2-硝基苯甲酸)；所述羧基信號分子為對巰基苯甲酸或2-硝基-5-巰基苯甲酸；所述氨基信號分子為對巰基苯胺或2-氨基-6-巰基嘌呤。

10.一種腫瘤標志物循環腫瘤DNA檢測試劑盒，其特征是包括權利要求1-5任一的腫瘤標志物循環腫瘤DNA檢測芯片，試劑1，試劑2和試劑3；

所述試劑1為5U/uL RNase HII溶液；

所述試劑2為10×buffer；

所述試劑3為用pH＝5.7-8.0磷酸鹽緩沖液配制濃度為0.5-10uM的FS序列的溶液；所述FS序列為與連接有連接分子的莖環結構探針的連接分子到一個核糖核苷酸之間的脫氧核糖核苷酸序列的反向互補序列。