[發明專利]海州常山干旱脅迫下熒光定量內參基因及其專用引物和應用

有效

• 申請號: 201811441119.7
• 申請日: 2018-11-28
• 公開（公告）號: CN109207634B
• 公開（公告）日: 2020-01-10
• 發明（設計）人: 岳遠征;杜菊花;王良桂;楊秀蓮;施婷婷;華雅潔
• 申請（專利權）人: 南京林業大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 32274 南京申云知識產權代理事務所(普通合伙)
• 代理人: 邱興天

本發明公開了海州常山干旱脅迫下熒光定量內參基因及其專用引物和應用，該熒光定量內參基因為Actin、AP?2和RAN基因，其中，Actin基因的基因序列如SEQ ID NO.1所示，AP?2基因的基因序列如SEQ ID NO.13所示，RAN基因的基因序列如SEQ ID NO.6所示。本發明通過從轉錄組數據以及前人研究的內參基因中篩選出表達較為穩定的候選基因，通過軟件對其穩定性進行評估，公開了3個適合于海州常山干旱脅迫下表達最穩定的內參基因，并用這些基因為基礎設計了實時熒光定量PCR引物，填補了海州常山干旱脅迫下沒有內參基因的現狀，為海州常山干旱脅迫下相關功能基因的精確定量提供有力支持，可提高研究的穩定性、重復性和可靠性。

技術領域

本發明屬于植物分子生物學領域，具體涉及海州常山干旱脅迫下熒光定量內參基因及其引物和應用。

技術背景

海州常山(Clerodendrum trichotomum Thunb.)又名臭梧桐，馬鞭草科(Verbenaceae)大青屬(Clerodendrum L.)落葉灌木或小喬木，較耐旱，耐鹽堿性較強，有一定耐寒性，極少病蟲害，適應性強。此外花形奇特美麗，花期長，果實色彩鮮艷且秋冬經久不落，是優良的秋季觀花、觀果樹種。現有的研究結果表明，海州常山不僅具有非常優良的耐鹽堿能力，還有較強的耐早性，是一種對不良環境具有較強抗性的優良園林植物。現在關于海州常山干旱脅迫下基因的研究還未曾有報道。探究海州常山干旱脅迫情況下基因表達的差異的研究過程中，涉及到運用實時熒光定量技術分析和驗證基因的表達水平就需要穩定可靠的內參基因，因此篩選海州常山干旱脅迫條件下穩定表達的內參基因是實時熒光定量結果準確的關鍵因素。

發明內容

發明目的：針對現有技術中存在的不足，本發明目的在提供適于海州常山干旱脅迫條件下的內參基因，該基因能夠滿足實時熒光定量檢測海州常山轉錄表達水平的要求，提高了海州常山基因表達分析研究的穩定性、可靠性和效率。本發明的另一目的是提供一種上述內參基因的專用引物。本發明還有一目的是提供一種上述內參基因或專用引物的應用。

技術方案：為了實現上述發明目的，本發明采用的技術方案為：

海州常山干旱脅迫下熒光定量內參基因，為Actin、AP-2和RAN基因，其中，Actin基因的基因序列如SEQ ID NO.1所示，AP-2基因的基因序列如SEQ ID NO.13所示，RAN基因的基因序列如SEQ ID NO.6所示。

所述的海州常山干旱脅迫下熒光定量內參基因的專用引物，Actin基因的引物序列如下：

Actin正向引物5’-CGATTCTTGCTTCCCTCAGTA-3’

Actin反向引物5’-ACCATTTTCGCCGCCTTA-3’。

所述的海州常山干旱脅迫下熒光定量內參基因的專用引物，AP-2基因的引物序列如下：

AP-2正向引物5’-CCACAACTAACGCCTCCACC-3’

AP-2反向引物5’-AAATTCACCCTCCGACTCCC-3’。

所述的海州常山干旱脅迫下熒光定量內參基因的專用引物，RAN基因的引物序列如下：

RAN正向引物5’-GGAGACGACAGTTTGGGTGC-3’

RAN反向引物5’-TGCCATACTTGCGGGTGAA-3’。

所述的海州常山干旱脅迫下熒光定量內參基因在海州常山熒光定量中的應用。

所述的Actin基因的引物序列在海州常山熒光定量中的應用。

所述的AP-2基因的引物序列在海州常山熒光定量中的應用。