[發明專利]一種用于褐苞薯蕷遺傳資源數據庫的ISSR專用引物及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201811437802.3
• 申請日: 2018-11-28
• 公開（公告）號: CN109338006B
• 公開（公告）日: 2021-10-12
• 發明（設計）人: 田慧;高慧新;譚勇;曾昭清
• 申請（專利權）人: 廣西中醫藥大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 南寧啟創知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 45122
• 代理人: 經國富

本發明公開一種用于褐苞薯蕷遺傳資源數據庫的ISSR專用引物及其制備方法和應用。本發明選用兩條背景清晰、擴增效果好和多態性高的ISSR引物，對不同產地褐苞薯蕷的DNA進行PCR擴增，構建褐苞薯蕷的遺傳資源數據庫。其引物為：①編號101，其引物序列為ACA CAC ACA CAC CGC；②編號121，其引物序列為ACA CAC ACA CAC TC。本發明以ISSR為起點，彌補了國內外對褐苞薯蕷分子標記研究甚少的不足，發明成果可用于褐苞薯蕷資源的遺傳多樣性評價、分子標記輔助育種、遺傳關系與品種純度分析等方面，具有相當大的科學價值與應用價值。

技術領域

本發明屬分子生藥學領域，具體涉及一種建立褐苞薯蕷遺傳資源數據庫的方法及其ISSR專用引物與應用。

背景技術

褐苞薯蕷來源為薯蕷科薯蕷屬植物褐苞薯蕷(Dioscorea persimilis Prain etBurkill)，別名廣西淮山，淮山，淮山藥，小薯，薯仔，山板薯。野生于海拔1 00～1950m的山坡、路旁、山谷雜木林或灌叢中。我國南方各地有栽培，主產于廣西陸川、玉林、桂平、平南、靈山。其根莖入藥，藥材名為廣山藥，是廣西的道地藥材；中醫認為其性味甘、平，具有“補脾養胃，生津益肺，補腎澀精”的功效，用于脾虛食少，久瀉，脾虛咳喘，腎虛遺精，帶下，尿頻，虛熱消渴等癥；《廣西壯族自治區壯藥質量標準》收載其性味甜、平，具有“調谷道氣道水道，補肺腎”的功效，用于埃病(咳嗽)，墨病(哮喘)，遺精，白凍(泄瀉)，喯疳(疳積)，隆白呆(帶下)，肉扭(淋癥)，啊肉甜(消渴)等癥。

目前對褐苞薯蕷的研究多集中在形態學、化學、藥理學；形態學研究法仍是辨別、鑒別種類和品種的最基本的依據，當前對大多數作物種質的鑒定，依然根據作物最鮮明的形態學特性進行區別、分類和命名。但是，形態學標記方法是一種表型性狀，標記數量少，標記有限，常與有害或不利性狀連鎖，數量性狀基因等位常需要嚴格控制實驗環境，易受到環境條件影響顯著，因此使用其鑒別的結果有很大的誤差，同時在使用過程中主觀因素較多，所以在植物遺傳育種中的應用會受到較大限制，形態學還需要其它的方法進行輔助鑒別。中國專利201610003073.5-《楊梅EST-SSR分子標記及其應用》提供了EST-SSR分子標記法對楊梅多樣性分析和品種鑒定，該分子標記法多態性相對低，因而使得后續的研究、分析不準確。中國專利201210200468.6-《豌豆孢囊線蟲特異性RAPD標記和SCAR標記快速分子檢測方法》提供了一種RAPD標記和SCAR標記快速分子檢測方法，該方法雖然具有所需DNA量極少，要求設備也相對簡單的優點，但是由于RAPD引物非常短，只有十個堿基，退火溫度也較低，因而重復性會變差，且容易產生非特異性條帶。

目前還未有學者利用ISSR分子標記對褐苞薯蕷的遺傳多樣性研究。

發明內容

本發明針對以上現有技術不足，提供一種用于褐苞薯蕷遺傳資源數據庫的ISSR專用引物及其制備方法和應用，本發明的ISSR標記技術結合了RAPD標記技術和SSR標記技術的優點，模板DNA用量少，操作簡單，方便，高效，重復性好，是一種應用于褐苞薯蕷植物種質資源的親緣鑒定以及育種親本選擇利用以及品種保護等方面的有效工具。

本發明的具體技術方案如下：

一種用于褐苞薯蕷遺傳資源數據庫的ISSR專用引物，所述的ISSR專用引物包括兩條：

(1)編號101，引物序列為ACACACACACACCGC；

(2)編號121，引物序列為ACACACACACACTC。

一種如前所述用于褐苞薯蕷遺傳資源數據庫的ISSR專用引物的制備方法，包括一下步驟：

(1)提取不同產地的褐苞薯蕷基因組DNA樣品；

(2)對步驟(1)提取的DNA樣品進行ISSR引物的設計；所述的ISSR引物設計原則為：2-3個堿基簡單重復4-5次，一端或者兩端加2-4個錨定堿基；共設計了50條引物，引物信息如下：