[發明專利]白及提取物體內原型成分及代謝成分的檢測方法

有效

• 申請號: 201811437131.0
• 申請日: 2018-11-28
• 公開（公告）號: CN109557203B
• 公開（公告）日: 2022-02-18
• 發明（設計）人: 黃勇;李勇軍;鄭林;潘潔;鞏仔鵬;李月婷;孫慧園;楊暢;陸苑;劉亭;馬雪;劉春花
• 申請（專利權）人: 貴州醫科大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 貴陽中新專利商標事務所 52100
• 代理人: 劉楠;李余江

本發明公開了一種白及提取物體內原型成分及代謝成分的檢測方法，該方法包括：大鼠口服白及提取物后，收集血清、尿液、糞便、膽汁生物樣品，采用超高效液相色譜?四級桿飛行時間串聯質譜聯用(UHPLC?Q?TOF?MS)技術檢測和代謝軟件分析，確定口服白及提取物后大鼠體內的原型成分和代謝成分，明確白及提取物中化學成分在體內的主要存在形式，為白及創新藥物的研制及質量控制提供了參考。

技術領域

本發明涉及藥物分析領域，特別涉及一種白及提取物體內原型成分及代謝成分的檢測方法。

背景技術

口服用藥是中醫藥治療的主要手段，現代研究證實，口服藥物經胃腸道的上皮細胞進入血液循環系統分布到各組織器官或靶點，并達一定血藥濃度時方可產生療效。在實際研究工作中常見許多中藥及其復方在血中未檢測出原型藥物成分，但藥效仍十分顯著，推測可能是藥物經體內生物轉化后產生的代謝成分發揮了治療作用。由此可見，中藥的體內代謝研究對明確中藥吸收進入體內成分的存在形式及其代謝途徑和機制，進而真正闡明中藥起效的作用物質基礎具有重要作用。

白及為蘭科植物白及Bletilla striata(Thunb.)Reichb.F的干燥塊莖，具有收斂止血、清熱利濕、消腫生肌之功效，在歷版《中國藥典》均有收載，主產于貴州、四川、湖南、湖北等省，廣泛應用于治療外傷出血、肺癆吐血、消化道出血、瘡瘍腫毒、皮膚皸裂等，療效顯著。白及主要含有聯芐類、二氫菲類、聯菲類、苷類及白及多糖等多種化合物，具有止血、促進傷口愈合、抗潰瘍、預防腸粘連、抗菌、抗腫瘤等功效。但現有研究除了白及多糖被證實有止血作用外，白及止血的其它作用物質及作用機制尚不清楚，特別是白及的體內直接作用物質的研究尚屬空白，嚴重制約了白及產品的深層次開發。因此，研究白及提取物吸收進入體內的成分及其存在形式，分析代謝產物結構類型，明確白及藥材中體內直接作用的化學成分，可為其創新藥物研究及質量控制奠定基礎。

發明內容

本發明的目的是為克服現有技術缺陷，提供一種白及提取物體內原型成分及代謝成分的檢測方法，

本發明的技術方案如下：

一種白及提取物體內原型成分及代謝成分的檢測方法，大鼠口服白及提取物后，制備并收集血清、尿液、糞便、膽汁生物樣品之一或組合，采用超高效液相色譜-四級桿飛行時間串聯質譜聯用(UHPLC-Q-TOF-MS)技術檢測和代謝軟件分析，確定口服白及提取物后大鼠體內的原型成分和代謝成分。

其中，口服白及提取物后的大鼠血清樣品制備方法包括以下步驟：于末次給藥后腹主動脈采血，取全血置于37℃恒溫水浴至上層有黃色液體析出，臺式離心機離心，取上層血清；將同組各血清混合，以消除個體差異，置于-20℃保存，備用；取大鼠血清，置于離心管中，補加甲醇，渦混震蕩后，依次超聲處理和離心處理，取上清液于37℃氮氣吹干，加入甲醇于吹干的樣品中，按上述處理方法加入甲醇二次沉淀蛋白，加入50％甲醇水溶液溶解殘留物，渦混震蕩后，依次超聲處理和離心處理，取上清液UHPLC-Q-TOF MS進樣分析。

其中，口服白及提取物后的大鼠尿液樣品制備方法包括以下步驟：分別收集12、24、48、72h時間段的尿液，并記錄各時間段的尿液體積，置于-20℃保存，備用；樣品處理前，等量混合各時間點尿液；取大鼠尿液，置于離心管中，補加甲醇，渦混震蕩后，依次超聲處理和離心處理，取上清液于37℃氮氣吹干，加入甲醇于吹干的樣品中，按上述處理方法加入甲醇二次沉淀蛋白，加入50％甲醇水溶液溶解殘留物，渦混震蕩后，依次超聲處理和離心處理，取上清液UHPLC-Q-TOF MS進樣分析。