[發(fā)明專利]一組判別尼群地平個體化用藥型的引物組合物

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201811432807.7
• 申請日: 2018-11-28
• 公開（公告）號: CN111235254A
• 公開（公告）日: 2020-06-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馬慶偉;劉昕超;鐘逾
• 申請（專利權(quán)）人: 北京毅新博創(chuàng)生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12N15/11
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本發(fā)明提供一組判別尼群地平個體化用藥型的引物組合物，其中制備方法包括：根據(jù)待測的2個目的SNP位點(diǎn)分別設(shè)計多重擴(kuò)增引物和延伸引物；配制多重擴(kuò)增引物反應(yīng)體系和延伸引物反應(yīng)體系；在反應(yīng)體系中，用多套引物同時分別對2個目的SNP位點(diǎn)進(jìn)行擴(kuò)增和單堿基延伸反應(yīng)；將單堿基延伸反應(yīng)后的產(chǎn)物進(jìn)行飛行時間質(zhì)譜分析，根據(jù)質(zhì)譜峰所代表的不同分子量延伸引物的產(chǎn)物，鑒定不同藥物代謝相關(guān)SNP的基因型，指導(dǎo)降高血壓藥物尼群地平的個體化用藥。本發(fā)明能同時檢測2個尼群地平代謝相關(guān)的SNP位點(diǎn)，并具有成本低、無需合成探針、耗時短、結(jié)果分析簡單便捷、應(yīng)用領(lǐng)域極其廣泛的優(yōu)點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)檢測領(lǐng)域，涉及一種利用質(zhì)譜特征峰圖檢測多重PCR單堿基延伸產(chǎn)物的方法及其產(chǎn)品，該方法可以在一個多重PCR反應(yīng)中同時檢測多個PCR單堿基延伸擴(kuò)增的寡核苷酸產(chǎn)物。更具體的說，該方法利用不同目的寡核苷酸片段在質(zhì)譜分型過程中生成的不同的時間飛行質(zhì)譜特征峰圖，針對多個目的SNP位點(diǎn)同時進(jìn)行檢測，指導(dǎo)降高血壓藥物尼群地平的個體化用藥。

背景技術(shù)

人類的遺傳信息儲存在基因組中，2002年國際合作項(xiàng)目人類基因組計劃的最終完成，繪制出了人類基因組結(jié)構(gòu)的精細(xì)圖，為相關(guān)研究提供了參考序列。人類基因組序列共由30 億個堿基組成，大量研究表明，人群中1％的遺傳差異大約占基因組序列的0.1％左右，即大約300萬個堿基的差異，在人群中超過1％的變異頻率。這些差異極有可能是造成兩個人之間個體差異的遺傳因素。發(fā)現(xiàn)這些位點(diǎn)，可廣泛地應(yīng)用于遺傳標(biāo)記的研究、評估個體遺傳關(guān)系、評估物種進(jìn)化等研究領(lǐng)域。

在人類基因組中，約90％的差異是以單個核苷酸的形式體現(xiàn)出來的，這樣的差異位點(diǎn)被稱作單核苷酸多態(tài)性(Single Nucleotide Polymorphism，SNP)。SNP具有兩個顯著的特點(diǎn)：一是數(shù)目眾多，據(jù)估計人類基因組中的SNP數(shù)目約在1100萬左右，目前NCBI dbSNP數(shù)據(jù)庫中已收錄來源于人類基因組的SNP達(dá)1083萬，其中經(jīng)過確認(rèn)的為644萬(截至2007 年8月22日)，如此大量的SNP方便了選擇合適的位點(diǎn)進(jìn)行疾病研究，也使得絕大多數(shù)基因組區(qū)域在SNP覆蓋范圍內(nèi)；另外一個特點(diǎn)是SNP位點(diǎn)大多數(shù)為雙態(tài)，即在一個位點(diǎn)上僅有兩種表現(xiàn)形式(基因型)，這樣很容易就能設(shè)計出高通量自動化的檢測方法。正因?yàn)檫@兩個特點(diǎn)，使得SNP位點(diǎn)越來越受到研究者的青睞，被譽(yù)為是繼限制性片段長度多態(tài)性 (RestrictionFragment Length Polymorphism，RFLP)和短串聯(lián)重復(fù)序列(short tandem repeat， STR)之后的第三代分子標(biāo)記物。人類基因組計劃完成前后，基因組學(xué)研究的重點(diǎn)逐漸轉(zhuǎn)向 SNP領(lǐng)域，因此，SNP在遺傳標(biāo)記學(xué)、生物群體遺傳學(xué)、生物分類學(xué)、遺傳育種學(xué)、物種或人類進(jìn)化學(xué)、法科學(xué)、藥物基因組學(xué)等領(lǐng)域都有重要的應(yīng)用。

心血管疾病是全球人類健康的首要疾病負(fù)擔(dān)。我國心血管病患病率處于持續(xù)上升階段。高血壓是最常見的心血管疾病之一，也是心血管病的主要危險因素。推算我國心血管病現(xiàn)患人數(shù)2.9億，其中高血壓占2.7億。約70％的腦卒中和50％的心肌梗死的發(fā)生與血壓升高有關(guān)，至少一半的心血管病死亡與高血壓有關(guān)。根據(jù)歷次全國性大規(guī)模高血壓患病率調(diào)查，從 1959年到2012年，大于等于18歲居民高血壓患病率已由5.1％上升到25.2％，上升趨勢明顯，已成為我國重要疾病負(fù)擔(dān)。因此，高血壓的防治已經(jīng)成為預(yù)防心血管疾病、保障國民健康的重要需求。