[發(fā)明專利]腫瘤相關(guān)基因RET突變短肽及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811430751.1
• 申請(qǐng)日: 2018-11-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109517053B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-10-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李許鋒;羅爾夫·馬丁;趙乙木
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 生命谷（海南）生物科技股份有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C07K14/705
• 分類(lèi)號(hào): C07K14/705;C12N5/0783;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 廣州市專注魚(yú)專利代理有限公司 44456
• 代理人: 凌霄漢

本發(fā)明公開(kāi)了一種腫瘤相關(guān)基因RET突變短肽及其應(yīng)用，多肽的序列為SEQ ID:2?43中的一條。本發(fā)明的RET突變短肽誘導(dǎo)建立的CTL對(duì)RET基因突變細(xì)胞能夠靶向免疫清除，誘導(dǎo)得到的CTL克隆具有良好的特異殺傷效應(yīng)。另外，在建立CTL過(guò)程中，所篩選出的RET突變肽抗原能夠與DC細(xì)胞上MHC I類(lèi)分子結(jié)合，并能夠有效地刺激、誘導(dǎo)闡述特異性CTLs，說(shuō)明具備良好的多肽疫苗及DC疫苗的潛力，能夠預(yù)防RET突變相關(guān)疾病，尤其是腫瘤性疾病，具有良好的臨床轉(zhuǎn)化及實(shí)際應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及腫瘤相關(guān)基因突變抗原肽及其應(yīng)用，特別涉及腫瘤相關(guān)基因RET突變短肽及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

2017年2月，國(guó)家癌癥中心發(fā)布了中國(guó)最新癌癥報(bào)告。報(bào)告顯示：在中國(guó)，每年新發(fā)癌癥病例達(dá)429萬(wàn)，也就是說(shuō)全國(guó)每天約1萬(wàn)人確診癌癥，每1分鐘約7人確診患癌。若中國(guó)人均預(yù)期壽命是85歲，那么每個(gè)人的累計(jì)患癌風(fēng)險(xiǎn)高達(dá)36％。在世界范圍內(nèi)，大約22％的新增癌癥病例和27％的癌癥死亡發(fā)生在中國(guó)。大部分癌癥疾病早期缺乏特異的臨床癥狀，在確診時(shí)往往處于中晚期，針對(duì)中晚期腫瘤的治療目主要是延長(zhǎng)患者生存期。因此，解決癌癥問(wèn)題的出路在于預(yù)防。

癌癥發(fā)生的具體機(jī)理尚未研究清楚，但可以肯定的是癌癥由基因突變引起，這里說(shuō)的突變包括基因堿基的點(diǎn)突變、缺失、插入，基因的非正常擴(kuò)增以及基因的異常融合。1990年，Eric Ft.Fearon和Bert Vogelstein在《Cell》上發(fā)表論文，提出腸癌癌變的模型，該過(guò)程顯示基因突變遠(yuǎn)早于臨床表現(xiàn)，可以作為癌癥早期診斷標(biāo)志物。斯特拉頓教授領(lǐng)導(dǎo)的研究小組，通過(guò)分析乳腺癌患者的基因組，解析了癌癥發(fā)生發(fā)展的全過(guò)程。他們發(fā)現(xiàn)在癌變發(fā)生的過(guò)程中，多數(shù)乳腺癌患者在有臨床癥狀之前，體內(nèi)的癌變就已開(kāi)始。如果以體細(xì)胞突變?yōu)槠瘘c(diǎn)算起，患者早在十余年前就已經(jīng)患上癌癥，而當(dāng)時(shí)并無(wú)任何臨床癥狀。因此，清除體內(nèi)突變的體細(xì)胞是預(yù)防癌癥的關(guān)鍵。

RET基因最早被發(fā)現(xiàn)于1985年，因其具有轉(zhuǎn)化培養(yǎng)中小鼠NTH/3T3細(xì)胞的能力而被確認(rèn)為原癌基因。RET原癌基因位于10號(hào)常染色體長(zhǎng)臂(10q11.2)，全長(zhǎng)60kb，包含21個(gè)外顯子，編碼1100個(gè)氨基酸的酪氨酸激酶受體超家族RET蛋白。RET蛋白屬于受體酪氨酸激酶蛋白家族中的成員，該受體是一種蛋白聚合體，是細(xì)胞生長(zhǎng)和分化傳導(dǎo)信號(hào)的細(xì)胞表面分子。RET蛋白包括富含半胱氨酸的胞外區(qū)、跨膜區(qū)和包含有酪氨酸激酶(tyrosine kinase，TK)的胞內(nèi)區(qū)部分。細(xì)胞外區(qū)包含4個(gè)類(lèi)黏附素的重復(fù)片段，1個(gè)鈣結(jié)合區(qū)和1個(gè)富含半胱氨酸的結(jié)構(gòu)區(qū)。其中類(lèi)黏附素的重復(fù)片段區(qū)域與細(xì)胞間信號(hào)傳遞密切相關(guān)；富含半胱氨酸結(jié)構(gòu)區(qū)則主要參與受體的二聚化。細(xì)胞內(nèi)區(qū)是一個(gè)含有TK的結(jié)構(gòu)區(qū)，在受體與配體結(jié)合后，胞內(nèi)區(qū)的TK磷酸化，激活下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，誘導(dǎo)細(xì)胞增生。RET原癌基因發(fā)生融合突變的分子機(jī)制類(lèi)似于ALK融合，如KIF5B-RET通過(guò)第10號(hào)染色體上的一個(gè)臂間倒位產(chǎn)生，而EML4-ALK作為最常見(jiàn)的ALK融合形式，通過(guò)在第2號(hào)染色體的一個(gè)臂內(nèi)倒位發(fā)生。RET基因通過(guò)本身斷裂與其他基因接合的方式發(fā)生重組，成為一個(gè)新的融合基因，使RET酪氨酸激酶的活化逃脫配體的調(diào)控，進(jìn)一步自我磷酸化，從而增強(qiáng)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能，促使激酶的活化以及原癌基因的轉(zhuǎn)化，引發(fā)腫瘤生成。RET基因突變首先在甲狀腺乳頭狀癌中被發(fā)現(xiàn)，被認(rèn)為是甲狀腺乳頭狀癌的一個(gè)驅(qū)動(dòng)基因。隨著研究的深入，逐漸發(fā)現(xiàn)很多疾病的發(fā)生與之密切相關(guān)，如甲狀腺髓樣癌、多發(fā)性內(nèi)分泌腺瘤2型、先天性巨結(jié)腸以及非小細(xì)胞肺癌(non-small celllungcancer，NSCLC)等。因此，RET基因通過(guò)融合突變的方式驅(qū)動(dòng)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。近年來(lái)的一系列研究發(fā)現(xiàn)，與RET基因發(fā)生融合突變的基因包括KIF5B(10p11.22)、CCDC6(10q21)、TRIM33(1p13.1)、NCOA4(10q11.2)，其中在NSCLC中KIF5B-RET型最常見(jiàn)。迄今為止，KIF5B-RET融合基因7個(gè)變種亞型已被鑒定:K15，R12是最常見(jiàn)的變體，占KIF5B-RET基因變體的60％～70％。

免疫學(xué)研究證實(shí)，CD8陽(yáng)性T淋巴細(xì)胞CTL發(fā)揮細(xì)胞免疫的原理為，CTL細(xì)胞通過(guò)識(shí)別與MHC-I分子結(jié)合的抗原肽被激活，被激活的CTL可以殺死相應(yīng)的靶細(xì)胞，發(fā)揮免疫監(jiān)視作用。