[發(fā)明專利]絲素固定芋頭多酚氧化酶的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811427743.1
• 申請日: 2018-11-27
• 公開（公告）號: CN109337892B
• 公開（公告）日: 2021-11-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 謝微;段振華;朱東建;蔡文;康超
• 申請（專利權(quán)）人: 賀州學院
• 主分類號: C12N11/02
• 分類號: C12N11/02;C12N9/02;C07K14/435;C07K1/14
• 代理公司: 深圳市博太聯(lián)眾專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 44354
• 代理人: 任轉(zhuǎn)英

1.一種絲素固定芋頭多酚氧化酶的方法，其特征在于，該方法包括如下步驟：

a、芋頭多酚氧化酶粗酶液的制備：將芋頭切塊，加入磷酸鹽緩沖液，按芋頭與磷酸鹽緩沖液固液比為1:2進行均質(zhì)，將均質(zhì)的混合液進行離心，經(jīng)靜置后，上清液即為芋頭多酚氧化酶粗酶液；

b、絲素的制備：將蠶繭剪成1~2cm²的小片，將蠶繭小片置于0.5%碳酸鈉(w/v = 1:50)溶液中，在沸水中加熱脫膠兩次，每次0.5h，烘干即得絲素；

c、絲素固定芋頭多酚氧化酶：在反應溫度為40℃，溶液的pH值為7下，向芋頭多酚氧化酶粗酶液中加入絲素進行芋頭多酚氧化酶固定化15min，所述絲素與芋頭多酚氧化酶粗酶液的固液比為1:35，并根據(jù)考馬斯亮藍法，通過紫外-可見分光光度法檢測，利用標準曲線和計算公式，確定固定化過程中多酚氧化酶的負載量、固定化酶活力、活力回收率及酶吸附含量。

2.如權(quán)利要求1所述的絲素固定芋頭多酚氧化酶的方法，其特征在于，步驟c中，所述紫外-可見分光光度法的吸收波長為595nm。

3.如權(quán)利要求1所述的絲素固定芋頭多酚氧化酶的方法，其特征在于，步驟c中，所述固定化過程中多酚氧化酶的負載量 = 原酶液蛋白質(zhì)濃度-固定化酶濾出蛋白質(zhì)濃度。

4.如權(quán)利要求1所述的絲素固定芋頭多酚氧化酶的方法，其特征在于，步驟c中，所述固定化酶活力的計算公式：

酶活力（U/g）=

式中：

△A——某一段時間內(nèi)吸光度的改變

N——總酶液體積與參與反應的提取體積之比

T——反應時間（min）

W——樣品重量（g）

活力回收率的計算公式：

回收率(%)=

式中：

r——固定化酶的活力(U/g )

R——相同條件下游離酶的活力(U/g )

酶吸附含量的計算公式：

酶吸附含量(mg/g) M=

式中：

M——酶吸附含量mg/g

C1——上清液未吸附的濃度（mg/mL）

C2——上清液吸附后的濃度（mg/mL）

m——加入的材料的質(zhì)量（g）。