[發明專利]一種利用黃腐酸提高核桃殼提取液中微藻油脂含量的方法

有效

• 申請號: 201811424795.3
• 申請日: 2018-11-27
• 公開（公告）號: CN109517853B
• 公開（公告）日: 2022-05-10
• 發明（設計）人: 余旭亞;李清清;趙永騰;董訓贊
• 申請（專利權）人: 昆明理工大學
• 主分類號: C12P7/6463
• 分類號: C12P7/6463;C12N1/38;C12N1/12
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開一種利用黃腐酸提高核桃殼提取液中微藻油脂含量的方法，屬于利用微藻生產生物柴油技術領域。本發明所述方法為：將核桃殼提取液作為微藻培養的基礎培養基，添加NaNO₃，調節pH、分裝、滅菌；將微藻接入培養基中，通入CO₂，同時添加黃腐酸進行培養；利用紫外分光光度計測定培養條件下微藻的生物量；微藻生長到達穩定期后，利用有機溶劑提取微藻細胞內的油脂。本發明方法提高了微藻中油脂的含量，不僅可以解決核桃殼的處理問題，同時為微藻培養提供了一種新的思路，成功實現了“變廢為寶”，節約了生產成本。

技術領域

本發明涉及一種利用黃腐酸提高核桃殼提取液中微藻油脂含量的方法，屬于利用微藻生產生物柴油技術領域。

背景技術

生物柴油由于其燃燒性高、無污染、可再生等特點，是傳統化石燃料理想的替代能源。作為生產生物柴油的原料，相比眾多非糧生物，微藻具有生長速率快，生長周期短，光合作用效率高，而且可以利用微生物發酵技術，在光反應器中高密度培養等優勢。一些微藻因其含油量高、易于培養、單位面積產量大等優點，而被稱為新一代生物柴油原。但由于微藻生長繁殖條件要求高，前期投資較大，同比造價上還高于化石燃料，所以急需提高其油脂產率。

目前，提高微藻油脂含量的傳統方法有：優化發酵條件和基因工程法。對微藻的發酵條件進行改良，可以很大程度的提高微藻的油脂含量；微藻中，油脂的積累涉及到脂類合成和代謝等多方面問題，所以基因工程法僅用單一的一種特異性基因，不能顯著的提高油脂含量。

核桃殼是核桃取仁后的堅硬外殼，核桃殼目前被用作農戶燃料或者直接丟棄，利用度較低且污染環境。在環境治理方面，核桃殼被用于重金屬離子的吸附和活性炭的制備，但以上僅從物理的角度對核桃殼加以利用，至今，尚未有人把核桃殼內的化學物質進行利用。現代研究發現核桃殼含有酚酸類、黃酮類、苷類等多種活性物質，具有抗氧化、抗菌等作用。

發明內容

本發明的目的在于提供一種利用黃腐酸提高核桃殼提取液中微藻油脂含量的方法，利用核桃殼提取液作為基礎培養基，通入CO₂，進行微藻培養，在黃腐酸的誘導下，微藻的油脂含量和生物量均有提高；本發明不僅可以解決核桃殼的處理問題，還可以提高微藻的油脂含量和生物量，成功實現了“變廢為寶”，節約了生產成本；該方法操作簡單易行，具體包括以下步驟：

（1）配制培養基：將核桃殼提取液作為微藻培養的基礎培養基，添加NaNO₃，調節pH、分裝、滅菌；

（2）微藻培養：將微藻接入步驟（1）中的培養基中，通入CO₂，同時添加黃腐酸進行培養；

（3）生物量和油脂含量的測定：利用紫外分光光度計測定培養條件下微藻的生物量；微藻生長到達穩定期后，利用有機溶劑提取微藻細胞內的油脂。

優選的，本發明步驟（1）中配制培養基的具體方法為：將核桃殼粉碎，煮沸4~4.5h作為基礎培養基，NaNO₃的添加量為1.1~1.2g/L，pH調節在6.8-7.0之間，滅菌條件為121℃、20 min。

優選的，本發明步驟（2）中微藻的初始接種量為0.38~0.42g/L，CO₂的通入量為11~13%，培養基中黃腐酸的濃度為20~80mg/L。

優選的，本發明微藻的培養條件是：光照強度為6000~7000lux，通氣量為0.5~0.6L/min，培養溫度為24~26℃。

本發明所述微藻生物量濃度的測定方法為常規方法，具體如下：根據藻細胞與吸光度A₇₅₀值在一定的范圍內成線性關系，得出單針藻Monoraphidiumsp.QLZ-3在750nm處的干重與吸光度的關系如下：