[發(fā)明專利]一種抗PG II的抗體及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811421434.3
• 申請(qǐng)日: 2018-11-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111217913B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-11-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孟媛;鐘冬梅;黃玉玲;游輝;范凌云
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 東莞市朋志生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C07K16/40
• 分類號(hào): C07K16/40;C12N15/13;G01N33/68
• 代理公司: 北京超凡志成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11371
• 代理人: 趙麗娜

本發(fā)明涉及一種新穎的包含PGII抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的分離的結(jié)合蛋白，并對(duì)該結(jié)合蛋白的制備、應(yīng)用等方面進(jìn)行研究。所述結(jié)合蛋白活性強(qiáng)，與人PGII蛋白具有很高的親和力，可廣泛應(yīng)用于PGII蛋白的檢測(cè)領(lǐng)域。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)和醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種抗PG II的抗體及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

胃蛋白酶原(Pepsinogen，PG)是胃液中胃蛋白酶的前體，蛋白分子約為43KD，由300個(gè)氨基酸組成。根據(jù)生化和免疫活性特征不同，可分為兩大亞群PGI(又稱PGA)和PG II(又稱PGC)，胃蛋白酶原A(PGA)來(lái)源于胃底腺的主細(xì)胞和頸粘液細(xì)胞，胃蛋白酶原C(PGC)來(lái)源于全胃腺(胃噴門腺、胃底腺、胃竇幽門腺)和遠(yuǎn)端十二指腸Brunner氏腺，前列腺和胰腺也產(chǎn)生少量的PGC，胃粘膜合成的PGC約為總量的25％，合成后的PG大部分進(jìn)入胃腔，在酸性胃液作用下活化成胃蛋白酶，只有少量的(約1％)PG透過(guò)胃粘膜毛細(xì)血管進(jìn)入血循環(huán)，進(jìn)入的量十分穩(wěn)定，因此血清PG濃度可以反映胃粘膜腺體的分泌水平。也間接反映了胃粘膜不同部位的分泌功能。當(dāng)胃粘膜發(fā)生病理變化時(shí)，血清PG含量也隨之改變，被稱為胃粘膜的“血清學(xué)活檢”。

正常人血液中PGI的含量為60.6±13.9ng/ml；PGII的含量為11.9±4.2ng/ml，PGI/PG II比值5.52±1.86。國(guó)內(nèi)外臨床研究指出，PG II與胃底粘膜病變的相關(guān)性較大，其升高與胃底腺管萎縮、腸上皮化生或假幽門腺化生、異型增生有關(guān)。測(cè)定PG II含量有助于檢測(cè)出十二指腸潰瘍、萎縮性胃炎、胃癌等其他消化道疾病，供臨床檢測(cè)和體檢篩查需求。在人群胃病篩查中，每個(gè)人做胃鏡檢查是不現(xiàn)實(shí)的，可以通過(guò)非侵入性血清PG檢測(cè)將淺表性胃炎、糜爛性胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、胃癌等高危人群篩查出來(lái)，再進(jìn)行胃鏡檢查是一種切實(shí)可行的方案，PGI/PGII比值是胃癌篩查的重要指標(biāo)之一，PGII檢測(cè)作為非侵入性方法，可降低患者痛苦，簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)，具有普查價(jià)值。

臨床上用于檢測(cè)水平PG II的方法有酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)，化學(xué)發(fā)光法，流式熒光發(fā)光法，時(shí)間分辨熒光免疫分析法，光激化學(xué)發(fā)光免疫分析法，膠體金等，不同方法都有各自的優(yōu)缺點(diǎn)，但是都需要針對(duì)于PG II的特異性單克隆抗體。

目前國(guó)內(nèi)用于檢測(cè)PG II的單克隆抗體基本自外國(guó)采購(gòu)，靈敏度、特異性上都存在缺陷。

有鑒于此，特提出本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明涉及一種新穎的包含PG II抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的分離的結(jié)合蛋白，靈敏度和特異性相較之現(xiàn)有的PG II的單克隆抗體都有明顯優(yōu)勢(shì)，本發(fā)明還對(duì)該結(jié)合蛋白的制備、應(yīng)用等方面進(jìn)行研究。

所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域包括選自下述氨基酸序列的至少一個(gè)互補(bǔ)決定區(qū)，或與下述氨基酸序列的互補(bǔ)決定區(qū)具有至少80％的序列同一性且與PGII具有K_D≤8.89×10^-8mol/L的親和力；

互補(bǔ)決定區(qū)CDR-VH1為G-F-S-X1-T-X2-Y-G-X3-H，其中，

X1是L、I或V，X2是T或S，X3是I、V或L；

互補(bǔ)決定區(qū)CDR-VH2為I-W-R-X1-S-T-X2-Y-N-X3-A-F，其中，

X1是GG或N，X2是E或D，X3是A或P；

互補(bǔ)決定區(qū)CDR-VH3為V-K-X1-K-R-Y-X2-N-Y-D-A-M-X3-Y，其中，

X1是K或R，X2是A或G，X3是E或D；

互補(bǔ)決定區(qū)CDR-VL1為T-A-S-S-S-X1-S-S-X2-Y-L-H，其中，

X1是I、V或L，X2是S或T；