[發(fā)明專利]一種用于防治小瓜蟲的抗菌肽

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811415560.8
• 申請日: 2018-11-27
• 公開（公告）號: CN109400691B
• 公開（公告）日: 2020-04-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 梅潔;熊陽;皇培培
• 申請（專利權(quán)）人: 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C07K14/46
• 分類號: C07K14/46;A61K38/17;A61P33/00
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務(wù)所 42001
• 代理人: 江麗麗;王敏鋒

本發(fā)明屬于水產(chǎn)養(yǎng)殖技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種抗菌肽YcHβ，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，可用于體外殺滅寄生于淡水魚類的小瓜蟲，經(jīng)試驗(yàn)證實(shí)，抗菌肽YcHβ是源于黃顙魚皮膚粘液的天然免疫物，對水產(chǎn)動(dòng)物無毒害，具有良好的膜穿透性，對小瓜蟲的不同生活史階段均有效果，能夠較容易殺死滋養(yǎng)體和掠食體，在較高濃度的抗菌肽YcHβ處理下也可破壞包囊期階段厚厚的包囊膜，從而導(dǎo)致包裹的子代蟲體溶解。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于水產(chǎn)養(yǎng)殖技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種體外防治小瓜蟲的抗菌肽及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

小瓜蟲病又稱白點(diǎn)病，是淡水魚類常見寄生蟲疾病，感染魚的體表、鰓和鰭條上有很多肉眼可見的小白點(diǎn)。病魚感染小瓜蟲后食欲不振，寄生鰓部位會(huì)導(dǎo)致鰓上皮細(xì)胞腫脹、壞死，從而影響魚體呼吸，另外小瓜蟲破囊而出時(shí)，導(dǎo)致傷口處又繼發(fā)感染、潰爛，導(dǎo)致魚大批量死亡，給養(yǎng)殖戶帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。對于小瓜蟲病的治療，已篩選的有效治療藥物如孔雀石綠、硝酸亞汞、醋酸亞汞，均由于毒性強(qiáng)、致癌、環(huán)境污染嚴(yán)重而被禁用。近年來中草藥上篩選的辣椒、生姜、五倍子等和高錳酸鉀、氯化鈉、福爾馬林、硫酸銅等有一定療效，但大多數(shù)藥物僅對掠食體階段有一定效果，對滋養(yǎng)體階段效果并不顯著。目前暫無較理想治療小瓜蟲藥物。

抗菌肽是廣泛存在于自然界生物體中的小分子多肽類物質(zhì)，是生物體內(nèi)先天性免疫重要組分，因其具有廣譜高效抗菌活性，不易產(chǎn)生耐藥性等特點(diǎn)，被認(rèn)為是抗生素的最理想替代品。研究表明，抗菌肽不僅具有抗細(xì)菌、真菌、病毒、寄生蟲等作用，在生物體內(nèi)還具有調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)，趨化免疫細(xì)胞和促進(jìn)細(xì)胞吞菌等作用，成為國內(nèi)外研究熱點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種從黃顙魚中分離獲得的抗菌肽及其應(yīng)用，該抗菌肽對水產(chǎn)動(dòng)物無毒害，對環(huán)境無污染，對寄生于淡水魚類的小瓜蟲均有效果，尤其對寄生于魚體表的小瓜蟲滋養(yǎng)體階段僅需15μg/ml即可完全殺死。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

一種抗菌肽，名為YcHβ，基于黃顙魚基因組、蛋白組，通過生物信息學(xué)技術(shù)分析得到，其序列為AAKLGPAAFTPEVHETWQKFLNVVVAALCKQYH，SEQ ID NO.1。基于多肽序列通過化學(xué)合成人工多肽，其純度大于90％。

抗菌肽YcHβ在制備殺滅小瓜蟲藥物中的應(yīng)用：經(jīng)試驗(yàn)證實(shí)，YcHβ對小瓜蟲的不同生活史階段均有效果，僅需要15μg/ml即可完全殺死小瓜蟲滋養(yǎng)體階段，125μg/ml可完全殺死小瓜蟲掠食體階段，當(dāng)濃度大于500μg/ml時(shí)，可破壞包囊期階段小瓜蟲的厚厚的包囊膜，隨后里面的子代蟲體溶解。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)及有益效果：

本發(fā)明所設(shè)計(jì)的抗菌肽YcHβ具有肽段序列短，穩(wěn)定性較好，可人工合成等特點(diǎn)。目前治療小瓜蟲的大多數(shù)藥物僅對水體中游離的掠食體階段有一定效果，對寄生宿主的滋養(yǎng)體階段無明顯成效；本發(fā)明抗菌肽僅需要15μg/ml即可完全殺死小瓜蟲滋養(yǎng)體階段，125μg/ml可完全殺死小瓜蟲掠食體階段，當(dāng)濃度大于500μg/ml時(shí)，可破壞包囊期階段小瓜蟲的厚厚的包囊膜，隨后里面的子代蟲體溶解。該抗菌肽作為黃顙魚先天性免疫組分，對魚體無副作用，對環(huán)境無污染。除此之外，YcHβ也對寄生于金魚、烏鱧、赤眼鱒和加州鱸的小瓜蟲具有較好殺傷效果。

附圖說明

圖1為人工合成的抗菌肽YcHβ的質(zhì)譜圖。

圖2為抗菌肽YcHβ對滋養(yǎng)體的作用效果(放大100倍)，A為處理前的滋養(yǎng)體，B為15μg/ml抗菌肽處理后的滋養(yǎng)體。

圖3抗菌肽對包囊體的作用效果(放大100倍)，A為處理前的包囊體，B為500μg/ml抗菌肽處理后的包囊體，箭頭所指為包囊膜。

圖4為抗菌肽對掠食體的作用效果(放大100倍)，A為處理前的掠食體，B為125μg/ml抗菌肽處理后的掠食體。