[發(fā)明專利]一種DNA表觀遺傳修飾的表面增強拉曼光譜檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811407848.0
• 申請日: 2018-11-23
• 公開（公告）號: CN109342396B
• 公開（公告）日: 2021-04-27
• 發(fā)明（設計）人: 吳萍;羅曉俊;邢應芳;蔡稱心
• 申請（專利權）人: 南京師范大學
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 樓高潮

1.一種DNA表觀遺傳修飾的表面增強拉曼光譜檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟1)制備周期性結構的金納米孔陣列：將PMMA旋涂在玻璃基板上，然后將基板暴露于電子束，產生納米孔陣列，在甲基異丁基酮/異丙醇溶液中顯影后接著用異丙醇沖洗，然后通過熱蒸發(fā)鍍膜技術將金膜蒸發(fā)到納米孔陣列上，得到所述周期性結構的金納米孔陣列，清洗后備用；

所述金納米孔陣列為層狀結構，共有三層，底層為Si片，中間層為厚度200nm的PMMA納米陣列，上層為50nm厚的金膜；金納米孔陣列呈周期性排列的孔洞結構，孔為圓形，半徑為100nm，深度為200nm，孔與孔之間的距離為604nm；步驟2)配置DNA混合溶液：將不同表觀遺傳修飾的待測DNA分別溶解在Tris-HCl緩沖液中得到DNA溶液，取DNA溶液與TCEP溶液常溫下混合反應，得到所述DNA混合溶液；

所述待測DNA的表觀遺傳修飾方式包括5-羥甲基胞嘧啶、5-醛基胞嘧啶和5-羧基胞嘧啶；

步驟3)不同DNA表觀遺傳修飾的拉曼檢測：將步驟2)制得的DNA混合溶液滴涂在步驟1)制備的金納米孔陣列中，0.5h后取出并用氮氣吹干，用拉曼儀器在金納米孔陣列表面不同區(qū)域處采集拉曼信號進行檢測，觀察不同待測DNA表觀遺傳修飾方式拉曼光譜圖的特征差異，根據拉曼信號強度和位移的變化實現不同待測DNA表觀遺傳修飾的檢測。

2.根據權利要求1所述的一種DNA表觀遺傳修飾的表面增強拉曼光譜檢測方法，其特征在于，步驟2)所述DNA溶液與TCEP溶液的摩爾濃度比例為1：50。

3.根據權利要求1所述的一種DNA表觀遺傳修飾的表面增強拉曼光譜檢測方法，其特征在于，步驟2)所述DNA溶液的配制過程為：將不同表觀遺傳修飾的待測DNA溶解在10mmol/LpH＝7.4的Tris-HCl溶液中，使其濃度為100μmol/L。

4.根據權利要求1所述的一種DNA表觀遺傳修飾的表面增強拉曼光譜檢測方法，其特征在于，步驟3)所述采集拉曼信號進行檢測的過程為：采用激發(fā)波長為785nm、功率為35mW的拉曼光譜儀，采集金納米孔陣列表面50個不同區(qū)域的拉曼光譜，獲得平均拉曼光譜。