[發明專利]一種具有免疫調節和抗紅細胞溶血活性東革阿里多糖及其制備方法

有效

• 申請號: 201811406965.5
• 申請日: 2018-11-23
• 公開（公告）號: CN109400746B
• 公開（公告）日: 2021-02-12
• 發明（設計）人: 吳暉;賀萍;王倩;賴富饒;張猛猛
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61P37/02;A61P7/00
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 何淑珍;馮振寧

1.一種具有免疫調節和抗紅細胞溶血活性東革阿里多糖的制備方法，其特征在于，取東革阿里根為原料，采用水提醇沉經透析、冷凍干燥后，用DEAE-Sepharose陰離子交換層析和SephadexG50凝膠滲透層析分離純化出具有免疫調節和抗紅細胞溶血活性東革阿里多糖。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）東革阿里粗多糖提取：向過篩后的脫脂東革阿里粉碎物中加入水，在70~90℃下攪拌，離心，收集上清液濃縮后添加無水乙醇，靜置，離心；獲得的沉淀用sevage試劑收集上層清液，濃縮后透析并冷凍干燥，得到東革阿里粗多糖；

（2）分離純化：將步驟（1）中得到的東革阿里粗多糖用水溶解，然后加入裝填了DEAE-Sepharose陰離子填料的柱子中，用洗脫液進行梯度洗脫，苯酚硫酸法追蹤在490nm波長下有吸收峰的洗脫液進行透析并冷凍干燥，向用超純水洗脫得到的組分中加入水，加入裝填了Sephadex G50填料的層析柱中，用超純水洗脫，在490nm波長下共有1個吸收峰，收集并凍干后，此組分為東革阿里多糖成品。

3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟（1）所述脫脂東革阿里粉碎物與水的質量體積比為1g:10ml~1g:30ml。

4.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟（1）所述攪拌的時間為1~3h；所述離心是6000~10000r/min低溫離心10~20min。

5.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟（1）中，收集上清液濃縮后添加5~10倍體積的無水乙醇。

6.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟（1）所述靜置是在4~8℃下靜置8~12h。

7.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟（1）中，獲得的沉淀用3~5倍體積sevage試劑收集上層清液，重復3~5次。

8.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟（2）中，按5 g:1 ml ~10 g:1 ml的比例用水溶解東革阿里粗多糖；所述梯度洗脫依次用超純水、0.05、0.1、0.3和0.5M NaCl溶液進行梯度洗脫，洗脫流速1.0~2 mL/min，10min/管。

9.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟（2）中，將用超純水洗脫得到的組分按5 g:1 ml ~10 g:1 ml的比例加入水，加入裝填了Sephadex G50填料的層析柱，加樣體積1~2 mL，再用超純水洗脫，洗脫流速0.5~1.0 mL/min，5 min/管。

10.由權利要求1-9任一項所述的方法制備的一種具有免疫調節和抗紅細胞溶血活性東革阿里多糖。