[發(fā)明專利]一種高活性微生物土壤修復(fù)劑的制備方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201811404735.5 | 申請日： | 2018-11-23 |
| 公開（公告）號： | CN109234260B | 公開（公告）日： | 2019-07-23 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 馬步華 | 申請（專利權(quán)）人： | 廣東省中藥研究所 |
| 主分類號： | C12N11/10 | 分類號： | C12N11/10;B09C1/10;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京風(fēng)雅頌專利代理有限公司 11403 | 代理人： | 王藝偉 |
| 地址： | 510000 廣東省廣*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 制備 高活性微生物 土壤修復(fù)劑 微生物土壤修復(fù)劑 生物可利用性 降解污染物 成品制備 市場推廣 土壤肥力 遷移性 包埋 稱取 改良 土壤 污染 應(yīng)用 | ||
1.一種高活性微生物土壤修復(fù)劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
（1）包埋型高活性微生物的制備：
a. 將伯克霍爾德氏菌CGMCC NO：6269接種到改良LB液體培養(yǎng)基中，經(jīng)活化培養(yǎng)得種子液；
b. 取5~10μL種子液接種到200~400mL改良LB液體培養(yǎng)基中，經(jīng)搖菌培養(yǎng)得伯克霍爾德氏菌菌液，在搖菌培養(yǎng)的同時進行特定頻率的聲波處理，所述聲波處理時聲波的頻率為13~19kHz；
c. 先將操作b中所得的伯克霍爾德氏菌菌液置于離心機中進行離心，收集沉淀風(fēng)干至含水率3~7%后得菌粉備用；
d. 將瓜爾膠和寡糖按照重量比為2~3:0.7~0.9共同投入到摩爾濃度為3~9moL/L的三（羥甲基）氨基甲烷溶液中，不斷攪拌直至瓜爾膠和寡糖完全溶解；
e. 先將操作c所得的菌粉和操作d所得的溶液按照重量比為0.8~1:2~3共同投入攪拌罐內(nèi)，以150~180rpm的轉(zhuǎn)速攪拌混勻后，用一次性滴管吸取溶液，然后滴入到質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10~12%的氯化鈣溶液中，形成凝膠球后放入6~10℃的環(huán)境中，低溫放置1~1.5h后取出凝膠球，再用去離子水反復(fù)沖洗去除未包埋的伯克霍爾德氏菌，濾干即得包埋型高活性微生物；
（2）原料稱?。?/p>
稱取相應(yīng)重量份的步驟（1）所得的包埋型高活性微生物34~42份、腐殖酸23~27份、活性炭16~20份、煤灰12~16份、沸石6~9份備用；
（3）成品制備：
將步驟（2）中稱取的所有原料投入攪拌罐內(nèi)，以700~900rpm的轉(zhuǎn)速進行攪拌，攪拌的同時進行特定頻率的微波活化處理，攪拌處理1~2h即可，所述微波活化處理時微波的頻率控制為20~30GHz。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種高活性微生物土壤修復(fù)劑的制備方法，其特征在于，所述步驟（1）操作a或操作b中改良LB液體培養(yǎng)基的制備，包括如下步驟：
1）稱取相應(yīng)重量份的胰蛋白胨7~9份、酵母提取物3~5份、氯化鈉3~5份、復(fù)合粉3~4份、純化水120~160份備用，所述復(fù)合粉的制備方法是將碳酸鈰和納米碳管按照重量比2.3~2.7:0.7~0.9共同浸入改性液中進行浸泡，浸泡時保持改性液中的溫度為70~80℃，改性的同時用頻率為45~55kHz的超聲波進行處理，50~70min后取出離心得濾渣備用；所述改性液中各成分及其對應(yīng)重量份為：10~20份甘油、7~9份氨水、0.4~0.6份甲基丙烯酸甲酯、4~5份硅烷偶聯(lián)劑、2~4份硫酸銨、70~80份無菌水；
2）先將步驟（1）稱取的純化水置于玻璃燒杯中，利用磁力攪拌器進行攪拌，同時進行加熱，然后等到純化水中的溫度升至70~80℃時，將步驟1）中稱取的胰蛋白胨、酵母提取物、氯化鈉、復(fù)合粉依次加入燒杯中，邊攪拌邊加入，再繼續(xù)加熱保持混合液中的溫度為95~99℃，保持95~99℃攪拌處理20~30min后停止加熱；
3）將步驟2）所得的混合液置于高溫高壓滅菌鍋內(nèi)進行滅菌處理，滅菌溫度為118~124℃，滅菌的時間為23~29min，取出冷卻至室溫即可。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種高活性微生物土壤修復(fù)劑的制備方法，其特征在于，所述步驟（1）操作a中伯克霍爾德氏菌的接種量為每1~3mL改良LB液體培養(yǎng)基中接種1~3μL伯克霍爾德氏菌菌種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種高活性微生物土壤修復(fù)劑的制備方法，其特征在于，所述步驟（1）操作a中種子液的OD600值為0.3~0.7。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種高活性微生物土壤修復(fù)劑的制備方法，其特征在于，所述步驟（1）操作b中伯克霍爾德氏菌菌液的OD600值為0.9~1.3。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種高活性微生物土壤修復(fù)劑的制備方法，其特征在于，所述步驟（1）操作c中離心機的轉(zhuǎn)速為5000~8000rpm。
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