[發明專利]一種油菜耐漬基因BnaLPP1及制備方法和應用

有效

• 申請號: 201811399759.6
• 申請日: 2018-11-22
• 公開（公告）號: CN109207487B
• 公開（公告）日: 2021-12-03
• 發明（設計）人: 鄒錫玲;劉月;程勇;張學昆;呂艷;丁曉雨;李春生
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院油料作物研究所
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12N15/82;C07K14/415;A01H5/00;A01H6/20
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所(普通合伙) 42001
• 代理人: 王敏鋒

本發明公開了一種油菜耐漬基因BnaLPP1的制備方法，步驟是：1、以淹水脅迫處理的油菜芽為材料，采用植物總RNA抽提試劑盒提取總RNA，采用反轉錄試劑盒，反轉錄合成cDNA第一鏈，擴增該基因片段；2、擴增程序：共35個循環，利用膠回收試劑盒回收PCR產物，接著將回收產物與pTOPO載體連接，得到重組質粒pTOPO?BnaLPP1，轉化大腸桿菌感受態細胞，測序，核苷酸序為SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2及氨基酸序列SEQ ID NO.3；3、對測序的結果與模板序列進行比對，采用膠回收試劑盒回收目的基因和表達載體。4、接著用T4連接酶，擴繁后提取重組質粒。5、對重組質粒進行酶切驗證。該基因的應用。方法易行，操作簡便，實現在油菜中的快速、準確分離。提高作物耐漬能力，對提高作物產量意義重大。

技術領域

本發明屬于生物工程和轉基因技術領域，更具體涉及一種油菜耐漬基因BnaLPP1，同時還涉及一種油菜耐漬基因BnaLPP1的制備方法，還涉及一種油菜耐漬基因BnaLPP1的用途。

具體涉及油菜耐漬基因BnaLPP1及其應用。

背景技術

漬害是制約長江流域農業生產的主要因素之一，由于長江流域濕潤多雨的氣候特點，加上栽培模式等因素的影響，更加導致了漬害程度加深。如何解決漬害問題是實現農業可持續發展的重要挑戰。

由于傳統作物耐漬育種周期長，成效緩慢且受耐漬種質資源狹窄等因素的制約，使得當前耐漬育種進展緩慢。當前迅速發展的生物技術育種，尤其是轉基因技術打破了物種間的限制，為高效耐漬育種提供了新的途徑，但耐漬基因資源的獲得是耐漬轉基因作物新品種的關鍵。油菜是世界上重要的油料作物之一，在我國油菜主要分布于長江流域,在該地區主要為水稻油菜的輪作制度，油菜漬害發生十分普遍，占長江流域總面積10-20％以上。從耐漬油菜品種中挖掘優異的耐漬基因材料，并克隆耐漬基因在植物耐漬育種中具有重要的價值。

發明內容

本發明的目的在于避免現有技術的不足之處，是在于提供了一種油菜耐漬基因BnaLPP1，這項研究對闡明植物耐漬機制以及利用耐漬基因提高作物耐漬能力有重要意義。超表達該基因可以有效提高淹水脅迫下植株存活率85％左右，并且其生長量比野生型提高65％。

本發明的另一個目的是在于提供了一種油菜耐漬基因BnaLPP1的制備方法，方法易行，操作簡便，實現該基因在油菜中的快速、準確分離。

本發明還有一個目的是在于提供了一種油菜耐漬基因BnaLPP1在提高植物耐漬中的應用，在漬害發生時，可以提高作物耐漬能力，對提高作物產量意義重大。

為了實現上述的目的，本發明采取以下技術方案：

依據前期油菜漬害脅迫響應轉錄組學測序結果(Comparison of TranscriptomesUndergoing Waterlogging at the Seedling Stage Between Tolerant and SensitiveVarieties of Brassica napus L.,Journal of Integrative Agriculture,2015,14(9):1723-1734)，鑒定到漬害脅迫誘導表達基因BnaLPP1，申請人以油菜芽為材料，分離出BnaLPP1基因，將該基因構建表達載體，轉化到擬南芥后，可顯著提高植株的耐漬能力。利用本發明所述基因，構建各種植物表達載體，可廣泛應用于轉基因植物和作物耐漬新品種的培育。

一種油菜耐漬基因BnaLPP1的制備方法，其步驟是：