[發明專利]一種基于陰離子交換色譜柱的SUMO化肽段的富集方法

有效

• 申請號: 201811390002.0
• 申請日: 2018-11-21
• 公開（公告）號: CN111208243B
• 公開（公告）日: 2022-05-17
• 發明（設計）人: 張麗華;李洋;孫明偉;單亦初;楊開廣;張玉奎
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: G01N30/08
• 分類號: G01N30/08;G01N30/14
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

1.一種基于陰離子交換色譜柱的 SUMO 化肽段的富集方法，其特征在于：包括： 1）蛋白質堿性位點酶切； 2）陰離子交換色譜柱分離：在堿性環境中通過陰離子交換色譜柱去除保留 弱的酶解肽段，收集保留較強的 SUMO 化肽段流出液；

其中步驟 2）所述的收集保留較強的 SUMO 化肽段流出液，具體步驟如下：在低鹽濃度流動相下的不保留肽段被洗脫后，收集在高鹽濃度流動相下的肽 段流出液，即在氯化鈉的摩爾濃度100 mM時不保留的肽段流出液，將溶液除鹽，凍干，得 SUMO 化肽段；所述的在堿性環境中通過陰離子交換色譜柱去除保留弱的酶解肽段，具體步驟如下：將蛋白酶解物溶液除鹽，凍干后，采用 A 相溶解并上樣到陰離子交換色譜柱上進行分離，流速為 0.1-3mL/min，在低鹽濃度的流動相下洗脫除去不保留的 酶解肽段，即氯化鈉的摩爾濃度≤100mM 時的不保留肽段；按體積百分濃度計，A 相：5-30%乙腈+1-10 mM 堿性溶液；B 相：5%-30%乙 腈+1-10 mM 堿性溶液+200-1000 mM 氯化鈉。

2.按照權利要求 1 所述富集方法，其特征在于：所述的蛋白質堿性位點酶切，具體步驟如下：于變性、還原、烷基化后的蛋白樣品溶液中加入蛋白水解酶進行酶解，蛋白水解酶用量為蛋白質質量的 1/5-1/100，酶解時間為 2-48 h，酶解溫度 25-45 °C，得到蛋白酶解物溶液。

3.按照權利要求1所述富集方法，其特征在于：陰離子交換色譜柱的分離梯度采用線性梯度或臺階梯度。

4.按照權利要求1 或 2 所述的方法，其特征在于：蛋白水解酶為胰蛋白酶，蛋白內切酶 Lys-C，蛋白內肽酶 Arg-C 中的一種或二種以上。

5.按照權利要求 1 或 3 所述的方法，其特征在于：所述的陰離子交換色譜柱的固定相為含有季銨基和/或叔胺基化學鍵合的聚合物基質材料；材料可以是顆粒材料或者整體材料；色譜柱內徑為 1-8 mm，長度為 5-30 cm。

6.按照權利要求 1 所述的方法，其特征在于：調節 pH 至堿性環境所采用的堿性溶液為 pH 為 8-14 的碳酸氫銨緩沖鹽溶液、pH為 8-14 的磷酸 緩沖鹽溶液、pH為 8-14 的三羥甲基氨基甲烷緩沖鹽溶液、氨水、碳酸鈉溶液、或氫氧化鈉溶液中的一種或二種以上配置而成；緩沖液濃度為 1-10 mM。

7.按照權利要求 5 所述的方法，其特征在于：聚合物基質材料包括聚丙烯 酸酯類基質、聚苯乙烯類基質、聚丙烯酰胺類基質中的一種或二種以上。

8.按照權利要求 1 所述的方法，其可應用于生物樣品中 SUMO 化修飾蛋白 2 以及肽段的富集和鑒定；生物樣品為細胞、組織、體液中的一種或二種以上。