[發明專利]一種基于sanger測序快速鑒定人體真菌的方法在審
| 申請號： | 201811386212.2 | 申請日： | 2018-11-20 |
| 公開（公告）號： | CN109722485A | 公開（公告）日： | 2019-05-07 |
| 發明（設計）人： | 辛文斌;孫子奎;丁方美;王鋒 | 申請（專利權）人： | 上海派森諾生物科技股份有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895;C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 上海天翔知識產權代理有限公司 31224 | 代理人： | 呂伴 |
| 地址： | 200030 上海市*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 快速鑒定 真菌 測序 數據處理步驟 合成步驟 基因序列 交叉污染 引物設計 提取DNA 誤判 菌落 準確率 比對 擴增 引物 質檢 驗證 物種 保存 | ||
1.一種基于sanger測序快速鑒定人體真菌的方法，其特征在于，包括如下步驟：
DNA提取和質檢步驟：使用分泌物(真菌)DNA提取試劑盒進行DNA提取；使用NanoDrop2000檢測樣品濃度和純度，當樣品的濃度>10ng/uL和純度在1.6～2.0之間，視為合格；
引物設計和合成步驟：根據要擴增的目的基因序列，在在NCBI網站(
PCR擴增步驟：確認DNA模板質量合格的情況下，可以安排進行PCR擴增，反應體系為25ul；以基因組為模板選用New England Biolabs,Ltd Q5超保真DNA聚合酶進行PCR擴增；
PCR產物純化步驟：使用1.5％瓊脂糖凝膠電泳對PCR擴增后的未純化樣品進行純化；
測序步驟：使用ABI公司的BDT3.1測序試劑盒進行測序的前處理后放入測序儀進行測序；
數據處理步驟：使用拼接軟件DNAStar進行拼接后使用blast方法進行處理。
2.如權利要求1所述的一種基于sanger測序快速鑒定人體真菌的方法，其特征在于，所述人體真菌包括光滑念珠菌、白色念珠菌/熱帶念珠菌、黃曲霉、煙曲霉、黑曲霉中的任意一種或多種。
3.如權利要求1所述的一種基于sanger測序快速鑒定人體真菌的方法，其特征在于，所述引物的設計包括光滑念珠菌、白色念珠菌/熱帶念珠菌、黃曲霉、煙曲霉、黑曲霉中的任意一種或多種的引物，具體如下：
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