[發明專利]一種傷寒桿菌重組蛋白及其單克隆抗體的制備在審
| 申請號： | 201811384880.1 | 申請日： | 2018-11-20 |
| 公開（公告）號： | CN109517072A | 公開（公告）日： | 2019-03-26 |
| 發明（設計）人： | 劉清泉;胡祥葉;朱偉;項美華;武戌青;王立童;吳瓊杉;余銘恩 | 申請（專利權）人： | 杭州賢至生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C07K19/00 | 分類號： | C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;C12N1/21;C07K16/12 |
| 代理公司： | 北京天奇智新知識產權代理有限公司 11340 | 代理人： | 朱海江 |
| 地址： | 311100 浙江省杭州市余杭*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 重組蛋白 單克隆抗體 傷寒桿菌 制備 優勢表位 純化單克隆抗體 單克隆細胞株 傷寒桿菌感染 生物技術領域 氨基酸序列 標記熒光 連接短肽 柔性片段 細胞融合 原核細胞 早期診斷 重組抗原 甘氨酸 抗原 鞭毛 單抗 多輪 可用 微球 正交 配對 串聯 篩選 重復 | ||
【權利要求書】：
1.一種傷寒桿菌重組蛋白，其氨基酸序列如SEQIDNo:1所示。
2.一種傷寒桿菌重組蛋白，其包含如SEQIDNo:2和SEQIDNo:3所示氨基酸序列。
3.一種核苷酸序列，其特征在于該核苷酸序列如SEQIDNo:4所示，可編碼權利要求1-2所述的重組蛋白。
4.一種質粒載體，其特征在于該質粒載體含有權利要求3所述的核苷酸序列。
5.一種采用權利要求4所述質粒載體轉化的菌株。
6.權利要求1-2所述的傷寒桿菌重組蛋白可用于單克隆抗體的制備，其特征在于包含以下步驟：
(a)人工設計并輔以計算機模擬傷寒桿菌H抗原的優勢表位，化學合成包含BamHI和EcoRI酶切位點的核苷酸序列；
(b)將化學合成產物BamHI和EcoRI雙酶切后連接至同樣BamHI和EcoRI雙酶切的pET-28a(+)載體中，得重組質粒；
(c)重組質粒轉化至大腸桿菌中誘導表達，純化透析即得SEQIDNo:1所示氨基酸序列的傷寒桿菌重組蛋白；
(d)重組蛋白多次免疫Balb/c小鼠后，取其脾臟細胞與sp2/0骨髓瘤細胞融合，經多輪篩選得到雜交瘤細胞株；
(e)純化單克隆抗體并分別標記熒光微球，正交實驗確定最佳單抗配對組合。
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