[發(fā)明專利]一種金色鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)四環(huán)素的方法

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• 申請(qǐng)日: 2018-11-20
• 公開（公告）號(hào): CN109371093A
• 公開（公告）日: 2019-02-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 章惠霞;李學(xué)兵;張志;陳惠琴
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 寧夏啟元藥業(yè)有限公司
• 主分類號(hào): C12P29/00
• 分類號(hào): C12P29/00;C12R1/485
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明涉及一種金色鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)四環(huán)素的方法，其工藝步驟為：將金色鏈霉菌原始菌株，用無菌水溶解稀釋，然后接入孢子培養(yǎng)基中，搖勻，在33?35℃溫度條件下，培養(yǎng)17?25小時(shí)，之后依次進(jìn)行種子培養(yǎng)和發(fā)酵培養(yǎng)，即可。所述孢子培養(yǎng)基組成為：麩皮1.0?1.5%，磷酸氫二鉀0.003?0.006%，淀粉1.0?1.6%，硫酸鎂0.01?0.03%，玉米漿0.3?0.8%，酵母粉0.03?0.06%，碳酸鈣0.01?0.03%。本發(fā)明區(qū)別于現(xiàn)有技術(shù)采用斜面培養(yǎng)的方式采用孢子培養(yǎng)的方式發(fā)酵生產(chǎn)四環(huán)素，且采用配制培養(yǎng)基培養(yǎng)孢子，克服了斜面培養(yǎng)基中瓊脂的影響因素，具有培養(yǎng)基不受原材料影響，材料易得，質(zhì)量穩(wěn)定的優(yōu)勢(shì)，用孢子液培養(yǎng)的菌種接入搖瓶種子，菌絲粗壯，舒展，對(duì)于各級(jí)培養(yǎng)液適應(yīng)能力強(qiáng)，移入發(fā)酵罐代謝速度快，四環(huán)素分泌早，發(fā)酵周期短，發(fā)酵水平得到大幅度提高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物與醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種金色鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)四環(huán)素的方法。

背景技術(shù)

四環(huán)素是一類大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，主要以金色鏈霉菌作為生產(chǎn)菌株。傳統(tǒng)的發(fā)酵菌種是將冷凍管菌種制備成斜面孢子，然后再由孢子接種于種子培養(yǎng)基中，由生長(zhǎng)良好的種子無菌接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中。其中斜面培養(yǎng)基采用麩皮做主要的碳源及微量元素供給，瓊脂作為凝固劑，以無機(jī)磷酸鹽提供磷及少量氮源。按上述培養(yǎng)基配方制備的菌種存在以下缺陷：

(1)麩皮作為孢子發(fā)芽生長(zhǎng)的唯一碳源提供者，其質(zhì)量受小麥生產(chǎn)產(chǎn)地、加工方法影響非常不穩(wěn)定，瓊脂雖然作為凝固劑，但對(duì)四環(huán)素斜面孢子生長(zhǎng)有特殊的影響，其成分復(fù)雜難易準(zhǔn)確判定，所以斜面外觀質(zhì)量受其影響波動(dòng)較大。

(2)因近些年，工業(yè)開發(fā)，環(huán)境污染日趨嚴(yán)重，麩皮及瓊脂質(zhì)量受生長(zhǎng)條件及環(huán)境影響，越來越不穩(wěn)定，造成制備的生產(chǎn)菌種質(zhì)量不穩(wěn)定；

(3)麩皮等原材料質(zhì)量變化，造成新選育出的菌種發(fā)生變化，采用上述配方已與新菌種生產(chǎn)不適宜，制備的菌種從外觀質(zhì)量到內(nèi)在孢子活力均受到影響。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的就在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種不受原材料影響，材料易得，質(zhì)量穩(wěn)定，所制得的孢子菌絲粗壯，各級(jí)培養(yǎng)液適應(yīng)能力強(qiáng)，發(fā)酵水平明顯提高的金色鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)四環(huán)素方法。

為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的所采取的技術(shù)方案為：

一種金色鏈霉菌發(fā)酵生產(chǎn)四環(huán)素的方法，其特征在于其工藝步驟為：將金色鏈霉菌原始菌株，用無菌水溶解稀釋，然后接入孢子培養(yǎng)基中，搖勻，在33-35℃溫度條件下，培養(yǎng)17-25小時(shí)，之后依次進(jìn)行種子培養(yǎng)和發(fā)酵培養(yǎng)，即可。

所述孢子培養(yǎng)基組成為：麩皮1.0-1.5％，磷酸氫二鉀0.003-0.006％，淀粉1.0-1.6％，硫酸鎂0.01-0.03％，玉米漿0.3-0.8％，酵母粉0.03-0.06％，碳酸鈣0.01-0.03％。

所述種子培養(yǎng)和發(fā)酵培養(yǎng)采用常規(guī)技術(shù)。

本發(fā)明區(qū)別于現(xiàn)有技術(shù)采用斜面培養(yǎng)的方式采用孢子培養(yǎng)的方式發(fā)酵生產(chǎn)四環(huán)素，且采用配制培養(yǎng)基培養(yǎng)孢子，克服了斜面培養(yǎng)基中瓊脂的影響因素，具有培養(yǎng)基不受原材料影響，材料易得，質(zhì)量穩(wěn)定的優(yōu)勢(shì)，用孢子液培養(yǎng)的菌種接入搖瓶種子，菌絲粗壯，舒展，對(duì)于各級(jí)培養(yǎng)液適應(yīng)能力強(qiáng)，移入發(fā)酵罐代謝速度快，四環(huán)素分泌早，發(fā)酵周期短，發(fā)酵水平得到大幅度提高。

具體實(shí)施方式

下面用實(shí)例予以說明本發(fā)明，應(yīng)該理解的是，實(shí)例是用于說明本發(fā)明而不是對(duì)本發(fā)明的限制。本發(fā)明的范圍與核心內(nèi)容依據(jù)權(quán)利要求書加以確定。

下述實(shí)施例中搖瓶種子培養(yǎng)基組成為：

淀粉2.0-4.0％，豆粉1.5-2.5％，酵母粉0.3-1.0％，蛋白胨0.3-1.0％，硫酸銨0.1-0.5％，溴化鈉0-0.5％，碳酸鈣0.1-0.5％，硫酸鎂0.01-0.04％，磷酸二氫鉀0-0.03％。