[發(fā)明專利]降高血壓藥物硝苯地平用藥指導(dǎo)基因檢測(cè)試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811379570.0
• 申請(qǐng)日: 2018-11-20
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111197077A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-05-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬慶偉;鐘逾
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京毅新博創(chuàng)生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6883
• 分類號(hào): C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明提供一種利用不同單核苷酸多態(tài)性(SNP)位點(diǎn)具有不同分子量的延伸引物，從而通過(guò)基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI?TOF MS)同時(shí)檢測(cè)多個(gè)位點(diǎn)，最終實(shí)現(xiàn)降高血壓藥物硝苯地平的用藥的方法和試劑盒。包括：根據(jù)待測(cè)的多個(gè)目的SNP位點(diǎn)分別設(shè)計(jì)多重?cái)U(kuò)增引物和延伸引物；配制多重?cái)U(kuò)增引物反應(yīng)體系和延伸引物反應(yīng)體系；在反應(yīng)體系中，用多套引物同時(shí)分別對(duì)多個(gè)目的SNP位點(diǎn)進(jìn)行擴(kuò)增和單堿基延伸反應(yīng)；將單堿基延伸反應(yīng)后的產(chǎn)物進(jìn)行飛行時(shí)間質(zhì)譜分析，根據(jù)質(zhì)譜峰所代表的不同分子量延伸引物的產(chǎn)物，鑒定不同藥物代謝相關(guān)SNP的基因型，最終實(shí)現(xiàn)降高血壓藥物硝苯地平的用藥。同時(shí)提供利用該方法的檢測(cè)試劑盒。本發(fā)明能同時(shí)檢測(cè)3個(gè)硝苯地平代謝相關(guān)的SNP位點(diǎn)，并具有成本低、無(wú)需合成探針、耗時(shí)短、結(jié)果分析簡(jiǎn)單便捷、應(yīng)用領(lǐng)域極其廣泛的優(yōu)點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分子生物學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域，涉及一種利用質(zhì)譜特征峰圖檢測(cè)多重PCR單堿基延伸產(chǎn)物的方法及其產(chǎn)品，該方法可以在1個(gè)多重PCR反應(yīng)中同時(shí)檢測(cè)多個(gè)PCR單堿基延伸擴(kuò)增的寡核苷酸產(chǎn)物。更具體的說(shuō)，該方法利用不同目的寡核苷酸片段在質(zhì)譜分型過(guò)程中生成的不同的時(shí)間飛行質(zhì)譜特征峰圖，針對(duì)多個(gè)目的SNP位點(diǎn)同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)，最終判別降高血壓藥物硝苯地平的個(gè)體化用藥型。

背景技術(shù)

人類的遺傳信息儲(chǔ)存在基因組中，2002年國(guó)際合作項(xiàng)目人類基因組計(jì)劃的最終完成，繪制出了人類基因組結(jié)構(gòu)的精細(xì)圖，為相關(guān)研究提供了參考序列。人類基因組序列共由30億個(gè)堿基組成，大量研究表明，人群中1％的遺傳差異大約占基因組序列的0.1％左右，即大約300萬(wàn)個(gè)堿基的差異，在人群中超過(guò)1％的變異頻率。這些差異極有可能是造成兩個(gè)人之間個(gè)體差異的遺傳因素。發(fā)現(xiàn)這些位點(diǎn)，可廣泛地應(yīng)用于遺傳標(biāo)記的研究、評(píng)估個(gè)體遺傳關(guān)系、評(píng)估物種進(jìn)化等研究領(lǐng)域。

在人類基因組中，約90％的差異是以單個(gè)核苷酸的形式體現(xiàn)出來(lái)的，這樣的差異位點(diǎn)被稱作單核苷酸多態(tài)性(Single Nucleotide Polymorphism，SNP)。SNP具有兩個(gè)顯著的特點(diǎn)：一是數(shù)目眾多，據(jù)估計(jì)人類基因組中的SNP數(shù)目約在1100萬(wàn)左右，目前NCBI dbSNP數(shù)據(jù)庫(kù)中已收錄來(lái)源于人類基因組的SNP達(dá)1083萬(wàn)，其中經(jīng)過(guò)確認(rèn)的為644萬(wàn)(截至2007年8月22日)，如此大量的SNP方便了選擇合適的位點(diǎn)進(jìn)行疾病研究，也使得絕大多數(shù)基因組區(qū)域在SNP覆蓋范圍內(nèi)；另外一個(gè)特點(diǎn)是SNP位點(diǎn)大多數(shù)為雙態(tài)，即在一個(gè)位點(diǎn)上僅有兩種表現(xiàn)形式(基因型)，這樣很容易就能設(shè)計(jì)出高通量自動(dòng)化的檢測(cè)方法。正因?yàn)檫@兩個(gè)特點(diǎn)，使得SNP位點(diǎn)越來(lái)越受到研究者的青睞，被譽(yù)為是繼限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(RestrictionFragment Length Polymorphism，RFLP)和短串聯(lián)重復(fù)序列(short tandem repeat，STR)之后的第三代分子標(biāo)記物。人類基因組計(jì)劃完成前后，基因組學(xué)研究的重點(diǎn)逐漸轉(zhuǎn)向SNP領(lǐng)域，因此，SNP在遺傳標(biāo)記學(xué)、生物群體遺傳學(xué)、生物分類學(xué)、遺傳育種學(xué)、物種或人類進(jìn)化學(xué)、法科學(xué)、藥物基因組學(xué)等領(lǐng)域都有重要的應(yīng)用。

我國(guó)心血管病患病率處于持續(xù)上升階段。高血壓是最常見(jiàn)的心血管疾病之一，也是心血管病的主要危險(xiǎn)因素。高血壓病人全球約有6.9億人，發(fā)病率高達(dá)31.3％。流行病學(xué)研究顯示，血壓水平與心血管病發(fā)病率呈線性相關(guān)；血壓升高是腦卒中和冠心病發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。高血壓是引起危及生命的心、腦血管病如心肌梗死、腦卒中、腎臟功能不全等的主要原因。

臨床上用于治療高血壓的藥物主要分為五類：利尿劑、β-腎上腺素受體阻滯劑、鈣拮抗劑、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑和血管緊張素II受體拮抗劑。后兩者都是作用于RAAS系統(tǒng)的抗高血壓藥物。為了降低相關(guān)的病死率及致殘率，高血壓患者通常需要長(zhǎng)期服用降壓藥物。