[發明專利]一種適用于低溫離心的葡聚糖凝膠層析柱的制備方法及應用

在審

• 申請號: 201811373552.1
• 申請日: 2018-11-10
• 公開（公告）號: CN109481961A
• 公開（公告）日: 2019-03-19
• 發明（設計）人: 湯飛宇;羅海華
• 申請（專利權）人: 江西農業大學
• 主分類號: B01D15/22
• 分類號: B01D15/22;B01D15/10;B01D15/26
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種適用于低溫離心的葡聚糖凝膠層析柱的制備方法及應用，稱取葡聚糖凝膠Sephadex G?25 3g，置入50ml柱平衡液，室溫下充分溶脹。戴上一次性PE手套取少量玻璃棉glass wool填入小型醫用注射針管的底部，壓實，填高至醫用注射針管的0.5ml刻度處，以替代商品層析柱的多孔板，注入已充分溶脹的葡聚糖至醫用注射針管的2.5ml刻度處，注入過程中防止產生氣泡，靜置5分鐘，然后置于4℃500轉/分中離心1分鐘，備用。與以往的脫鹽器具和方法相比，既能達到理想的脫鹽效果，又極大縮短了脫鹽時間，節約了實驗成本，具有較高的應用價值。

技術領域

本發明屬于化學技術領域，具體地說，涉及一種適用于低溫離心的葡聚糖凝膠層析柱的制備方法及應用。

背景技術

在植物生理生化實驗中，經常需要檢測酶的活性。從植物材料抽取的粗酶液通常含有許多雜質，其中過多的無機鹽會嚴重抑制酶蛋白催化活性的表達，甚至檢測不到酶的活性。傳統的脫鹽方法是層析或透析，分別利用商品化的葡聚糖層析柱或纖維素透析袋進行，層(透)析時間長，程序復雜，效率低，且商品價格較昂貴。纖維素透析膜(袋)的缺點：透析必須在容器中進行，時間長(需要過夜)，中間需要多次更換透析液，透析的樣品越多，對容器的容積要求越大，纖維素透析膜系專用產品，必須購自相關的公司。葡聚糖凝膠層析柱：系葡聚糖經緩沖液溶脹后注入專用的玻璃層析柱制備而成。裝柱長，通常柱高在15cm以上，需要的葡聚糖多；通過層析柱的過濾進行脫鹽，時間長；不能在低溫條件下(4℃)進行，影響酶蛋白的活性；裝柱和過濾時間長，不適宜大批量樣品的處理。

發明內容

本發明的目的在于去除植物材料中酶提取液中的小分子雜質，主要是鹽離子和少量低分子量的有機溶劑分子，減輕這些雜質對提取液中酶活性的影響，提供一種適用于低溫離心的葡聚糖凝膠層析柱的制備方法及應用。該方法取材方便，制作簡單，葡聚糖裝柱長度短，節省了成本；該層析柱可適用于低溫離心，通過低溫離心機的低速離心取代傳統的過濾，極大地縮短了脫鹽時間，適用于大批量樣品的處理。

其具體技術方案為：

一種適用于低溫離心的葡聚糖凝膠層析柱的制備方法，包括以下步驟：稱取葡聚糖凝膠Sephadex G-25 3g，置入50ml柱平衡液，室溫下充分溶脹。戴上一次性PE手套取少量玻璃棉(glass wool)填入小型醫用注射針管的底部，壓實，填高至醫用注射針管的0.5ml刻度處，以替代商品層析柱的多孔板，注入已充分溶脹的葡聚糖至醫用注射針管的2.5ml刻度處，注入過程中防止產生氣泡，靜置5分鐘，然后置于4℃500轉/分中離心1分鐘，備用。

進一步，所述柱平衡液的成分為：25mM Hepes-NaOH pH 7.5，1mM Na₂-EDTA，5mMMgCl₂。

進一步，所述小型醫用注射針管的規格為3ml。

本發明所述方法制備的適用于低溫離心的葡聚糖凝膠層析柱在植物酶提取液脫鹽中的應用。

進一步，所述應用具體為：將制好的層析柱置于10ml或15ml聚乙烯PE離心管內，并在層析柱上注入待脫鹽的粗酶提取液，在4℃500轉/分中離心5min，離心后管內的液體即為脫鹽后的酶提取液。

與現有技術相比，本發明的有益效果為：

1.自制葡聚糖凝膠層析柱，用材少，制作便捷，節省了成本；

2.與低溫離心技術相結合，通過離心脫鹽，極大縮短了脫鹽時間，尤其適用于大批量樣品的處理；

3.脫鹽在低溫條件下進行，有利于保護酶的活性。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發明的技術方案作進一步詳細地說明。

1.葡聚糖凝膠層析柱的制備