[發明專利]一種誘導礬根不定芽再生的方法

有效

• 申請號: 201811373025.0
• 申請日: 2018-11-19
• 公開（公告）號: CN109430056B
• 公開（公告）日: 2021-11-09
• 發明（設計）人: 孫翊;張永春;殷麗青;蔡友銘;楊柳燕;庹曉慶;田莉
• 申請（專利權）人: 上海市農業科學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 上海開祺知識產權代理有限公司 31114
• 代理人: 張曉敏;費開逵

一種誘導礬根不定芽再生的方法，以礬根無菌苗的葉柄或葉片作為外植體，接種于誘導培養基上，進行誘導培養，獲得礬根不定芽；其中，所述誘導培養基以MS為基本培養基，添加蔗糖2?4wt.％，瓊脂粉0.5?0.7wt.％，萘乙酸0.05?0.15mg/L，噻苯隆0.1?0.2mg/L或6?芐氨基嘌呤0.2?1.0mg/L，pH5.5?6.0；本發明簡化了自誘導愈傷組織培養基轉接至不定芽分化培養基的步驟，且有效解決了不定芽的玻璃化問題，操作簡便，經濟有效，能夠為礬根種苗的快速繁殖、新品種的培育，以及利用基因工程手段進行礬根性狀的改良提供技術支持。

技術領域

本發明屬于植物的組織培養技術領域，具體涉及一種誘導礬根不定芽再生的方法。

背景技術

礬根(Heuchera spp.)系虎耳草科礬根屬植物，是一種多年生常綠草本花卉，原產于美洲中部。因其花葉兼美，葉色亮麗且顏色豐富，是不可多得的新優彩葉觀賞植物，可作為邊飾、叢植、地被、盆栽等材料應用，在我國花卉市場上不斷升溫。

絕大部分礬根品種依靠無性繁殖方法進行種苗生產，分株繁殖和扦插繁殖因周期長、繁殖系數低、受季節影響大等不足，具有一定的局限性。

目前，組織培養技術是規?；庇\根種苗的主要方法?，F有的礬根組培快繁技術均以芽作為起始擴繁的材料，存在材料取材困難、數量較少、對母株破壞性大等問題。

現有技術中，以礬根‘巴黎’葉柄作為起始擴繁材料，經過誘導培養和分化培養兩個階段，在誘導培養基上進行誘導培養，葉柄產生愈傷組織，再進一步轉接至不定芽分化培養基上進行分化培養，獲得不定芽。該方法中，其不定芽的分化率相對較低，且必需經過愈傷組織的轉接過程，操作復雜、成本較高，且增加了無菌操作過程中的污染幾率。

發明內容

本發明的目的在于提供一種誘導礬根不定芽再生的方法，簡化了自誘導愈傷組織培養基轉接至不定芽分化培養基的步驟，不定芽再生率在62.5％以上，可高達89.58％，該方法簡便經濟且有效，能夠為礬根種苗的快速繁殖、新品種的培育，以及利用基因工程手段進行礬根性狀的改良提供技術支持。

為了達到上述目的，本發明提供如下技術方案：

一種誘導礬根不定芽再生的方法，包括以下步驟：

1)接種

以礬根無菌苗的葉柄或葉片作為外植體，接種至誘導培養基中；

2)誘導培養

將接種至誘導培養基中的外植體先暗培養14-28天，之后光照培養25-40天，獲得礬根不定芽；

其中，培養溫度為24±2℃，光照培養的光照時間為10-14h/d；

其中，所述誘導培養基以MS為基本培養基，添加蔗糖2-4wt.％，瓊脂粉0.5-0.7wt.％，萘乙酸0.05-0.15mg/L，噻苯隆0.1-0.2mg/L或6-芐氨基嘌呤0.2-1.0mg/L，pH5.5-6.0。

進一步，步驟1)中，所述外植體為葉片時，將葉片剪成0.5～0.8cm×0.5～0.8cm的葉盤，進行接種。

又，步驟1)中，所述外植體為葉柄時，將葉柄的長度剪至0.8～1cm，接種于誘導培養基上。

優選地，步驟2)中，所述暗培養時間為21天，光照培養時間為30天。

又，步驟2)中，所述培養溫度為25℃，光照培養的光照時間為12h/d。

進一步，所述外植體為葉柄時，所述誘導培養基中，6-芐氨基嘌呤0.2-0.5mg/L，pH5.8。

優選地，所述外植體為葉片時，所述誘導培養基中，6-芐氨基嘌呤0.5-1.0mg/L，pH5.8。