[發明專利]一種基于NiFe2

有效

• 申請號: 201811371119.4
• 申請日: 2018-11-18
• 公開（公告）號: CN109490282B
• 公開（公告）日: 2021-05-11
• 發明（設計）人: 戴宏;高利紅;鄭紅利;衣歡;鄭祥欽;張書培
• 申請（專利權）人: 福建師范大學
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;G01N27/30;G01N27/327
• 代理公司: 福州智理專利代理有限公司 35208
• 代理人: 王義星

1.一種基于NiFe₂O₄納米管催化增強的卵巢癌標志物比率型電致化學發光傳感平臺的制備方法，其特點在于，包括以下步驟：

（1）玻碳電極（GCE）首先在鋪有氧化鋁粉末的麂皮上機械打磨拋光，用二次水洗去表面殘留粉末，再移入超聲水浴中清洗，直至清洗干凈，最后依序用乙醇，稀酸和水徹底洗滌；

（2）取40 μL摩爾濃度比為4:1的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽（EDC）及N-羥基琥珀酰亞胺（NHS）混合液加入到80 μL 濃度為4.2 μg/mL的抗體（Ab₁）溶液中，4 ℃下震蕩40 min，以達到活化羧基的目的；將80 μL Envision 復合物溶液加入到混合溶液中，室溫震蕩50 min，以完成酰胺反應，從而得到Envision-Ab₁復合物溶液；取200 μL上述Envision-Ab₁復合物溶液加入200 μL 濃度為1 mg/mL NiFe₂O₄納米管（NiFe₂O₄ NTs），在室溫下反應4 h，后經洗滌、離心、再分散，最終制得NiFe₂O₄ NTs/Envision-Ab₁復合物；滴加3μL上述所得NiFe₂O₄ NTs/Envision-Ab₁復合物懸浮液于干凈的玻碳電極表面，紅外燈下烘干，冷卻至室溫，制得Ab₁-Envision/NiFe₂O₄ NTs修飾玻碳電極；

（3）將步驟（2）制備的修飾玻碳電極置于濃度為1.0 wt.%的BSA溶液中孵育30 min，以封閉電極界面上非特異性結合位點，用去離子水沖洗電極表面洗去物理吸附，并保存在4℃冰箱中備用；

（4）將步驟（3）獲得的修飾電極浸入不同濃度的人附睪蛋白4（HE4）標準溶液中并在4℃冰箱中孵育50 min，用去離子水沖洗電極表面，制得HE4/Ab₁-Envision/NiFe₂O₄ NTs修飾玻碳電極，并保存在4 ℃冰箱中備用；

（5）將200 μL濃度為1 mM的光澤精（lucigenin）與200 μL濃度為5 mg/mL六方氮化硼納米片（h-BN）混合，室溫震蕩3 h，經洗滌、離心、再分散制得h-BN@lucigenin復合物溶液；然后將80 mL 濃度為10 mM的1-氨基芘（AP）加入到上述復合物溶液中，在室溫下混合震蕩6h，以完成π-π堆疊反應，經洗滌、離心去除過量1-氨基芘，制得氨基化的h-BN@lucigenin復合物；隨后，在5 wt.%戊二醛（GLD）的輔助作用下加入80 μL二抗（Ab₂），在室溫下震蕩30min，經離心、洗滌、再分散制得h-BN@lucigenin@Ab₂生物復合物溶液，然后在上述h-BN@lucigenin@Ab₂生物復合物溶液中加入1 % BSA封閉非特異性吸附位點，儲存在4℃冰箱中備用；

（6）取3 μL步驟（5）制得的h-BN@lucigenin@Ab₂生物復合物溶液于步驟（4）制備的修飾電極界面，并在4 ℃下孵育40 min，用去離子水沖洗電極表面，制得h-BN@lucigenin@Ab₂/HE4/Ab₁-Envision/NiFe₂O₄ NTs修飾玻碳電極, 并保存在4 ℃冰箱中備用。