[發明專利]一種快速定量檢測CK-MB的微流控熒光免疫芯片

在審

• 申請號: 201811370129.6
• 申請日: 2018-11-17
• 公開（公告）號: CN109211866A
• 公開（公告）日: 2019-01-15
• 發明（設計）人: 牛亞靜;付紅偉;張娟麗;高勇;徐潑實;李海劍;李偉甲;劉亞品;馬萬順
• 申請（專利權）人: 鄭州親和力科技有限公司
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N33/533;G01N33/543
• 代理公司: 鄭州天陽專利事務所(普通合伙) 41113
• 代理人: 聶孟民

1.一種快速定量檢測CK-MB的微流控熒光免疫芯片，包括底板、頂板、樣品加樣區、微柵反應腔、識別反應區、廢液室和血細胞過濾區，其特征在于，所述的底板（1）為空心凹槽長方形，頂板（2）置于底板凹槽的正上方，構成底板和頂板的密封結構，頂板的上平面有樣品加樣口（11）和負壓接口（9），底板的凹槽內經回形管（10）裝有串接在一起的樣品加樣區（3）、血細胞過濾區（12）、微柵反應腔（5）、時間閥（6）、識別反應區（7）和廢液池（8），血細胞過濾區（12）上裝有血細胞濾膜（4），樣品加樣口（11）正對底板樣品凹槽內的樣品加樣區（3），回形管（10）的負壓端接負壓接口（9），微柵反應腔（5）預封裝熒光標記的抗CK-MB單克隆抗體混合樣品，構成樣品與熒光標記的BNP單克隆抗體混合反應區；識別反應區（7）包被抗CK-MB的單克隆抗體；樣品加樣區（3）中的樣品靠自虹吸作用移動或采用負壓接口連接控制泵進行移動；

所述的CK-MB單克隆抗體的制備方法是：

1）、熒光微球的活化、洗滌，此步驟需要將熒光微球表面修飾基團活化，取直徑為200nm熒光微球，加入緩沖液離心，棄上清，沉淀用洗滌緩沖液重復洗滌3次；將末次沉淀重懸于所述洗滌緩沖液中，使熒光微球的質量體積比終濃度為1%，所述洗滌緩沖液選自PBS緩沖液和MES緩沖液中的一種；

2）、CK-MB抗體包被熒光微球，取1 ml活化洗滌后的200 nm膠乳溶液，加入抗CK-MB抗體，使抗CK-MB抗體終濃度為1 mg/ml ；混勻后，置4度，搖床以220rpm轉速包被8h；用PBS緩沖液洗滌未與熒光微球結合的抗CK-MB抗體，重復3次；封閉：將洗滌后的抗CK-MB抗體的熒光微球溶于包含所述保護劑的緩沖液中，使所述熒光微球的質量體積比終濃度為0.1-0.14%；

3）、抗CK-MB抗體和熒光微球結合后封閉，將所述熒光微球與所述抗CK-MB抗體混合物，加入BSA0.3%，室溫下反應2 h，離心，除去其中少量的沉淀物；清洗，將形成的熒光微球-抗CK-MB抗體復合物溶液離心，棄上清，加入磷酸鹽緩沖液重復清洗3次；將末次沉淀溶于含所述保護劑和防腐劑的緩沖液中，使所述熒光微球的質量體積比終濃度為0.04%-0.14%。

2.根據權利要求1所述的快速定量檢測CK-MB的微流控熒光免疫芯片，其特征在于，所述熒光標記抗體為熒光微球標記抗體，所述熒光微球載體為天然或合成的有機高分子材料，負載的熒光物質有機物，其激發波長為620-680 nm，發射波長為730-790 nm，粒徑為100-500 nm。

3.根據權利要求1所述的快速定量檢測CK-MB的微流控熒光免疫芯片，其特征在于，所述的頂板上開有排氣孔。

4.根據權利要求1所述的快速定量檢測CK-MB的微流控熒光免疫芯片，其特征在于，所述的樣品加樣區上開有圓形或方形的加樣孔（11）。

5.根據權利要求1所述的快速定量檢測CK-MB的微流控熒光免疫芯片，其特征在于，所述底板為長方形的凹槽狀，具有不同功能微結構，底板和頂板采用膠粘、機械固定、超聲封合密封固定在一起。

6.根據權利要求1所述的快速定量檢測CK-MB的微流控熒光免疫芯片，其特征在于，所述微柵反應腔，包括有等間距排列的微結構，所述微結構為梯形、三角形、半圓形的一種。

7.根據權利要求1所述的快速定量檢測CK-MB的微流控熒光免疫芯片，其特征在于，所述時間閥包括阻滯欄結構形成的導流槽，每個阻滯欄呈下寬上窄的梯形、階梯形或三角形。

8.根據權利要求1所述的快速定量檢測CK-MB的微流控熒光免疫芯片，其特征在于，所述識別反應區，包括有等間距排列的微結構，所述微結構為梯形、三角形、半圓形。