[發(fā)明專利]利巴韋林半抗原和人工抗原及其制備方法與應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811367056.5
• 申請(qǐng)日: 2018-11-16
• 公開（公告）號(hào): CN109438424B
• 公開（公告）日: 2020-07-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 沈建忠;王戰(zhàn)輝;溫凱;江海洋;于雪芝;柯躍斌;朱建宇;史為民;張素霞;張西亞
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C07D405/04
• 分類號(hào): C07D405/04;C07K14/765;C07K14/77;C07K14/795;C07K14/47;C07K16/44;G01N33/569;G01N33/558
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;黃爽

1.利巴韋林半抗原，其特征在于，其結(jié)構(gòu)如式(I)所示：

2.權(quán)利要求1所述半抗原的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)將48.0g利巴韋林、6.17g對(duì)甲苯磺酸和39.2mL 2,2-二甲氧基丙烷溶于500mL丙酮中，混合液在60℃反應(yīng)3h；加入1mL 5％的碳酸氫鈉終止反應(yīng)；清除沉淀后，收集和濃縮濾液，經(jīng)柱層析純化后得到式(III)化合物；

2)將35.0g對(duì)氟苯甲酸、15.0g二甲氨基吡啶溶于500mL叔丁醇中冷卻至0℃；向混合液中添加107.50g二碳酸二叔丁酯，然后在室溫下攪拌16h，得到無色油狀產(chǎn)物，將該無色油狀產(chǎn)物與15.0g式(III)化合物和60.0g碳酸銫溶于300mL二甲基亞砜中，110℃持續(xù)加熱16h；二甲基亞砜通過減壓蒸餾除去；向殘余物中加入200mL水，使用二氯甲烷萃取，并用硫酸鈉干燥后濃縮，殘余物通過柱層析進(jìn)行凈化，將得到的6.0g白色固體狀產(chǎn)物在室溫下溶解于鹽酸和四氫呋喃的混合液100mL中，攪拌16h，用碳酸氫鈉調(diào)pH至7-9，過濾混合物后得到粗產(chǎn)物；粗產(chǎn)物進(jìn)一步與甲醇結(jié)晶，即得；

其中，步驟2)進(jìn)行柱層析所用流動(dòng)相由甲醇和二氯甲烷按50:1體積比混合而成，所用固定相為200-300目的硅膠；所述鹽酸和四氫呋喃的混合液是由四氫呋喃和濃度12mol/L的鹽酸按9:1體積比混合而成。

3.利巴韋林人工抗原，其特征在于，由權(quán)利要求1所述利巴韋林半抗原與載體蛋白偶聯(lián)后得到；

其中，所述載體蛋白選自牛血清白蛋白、卵清蛋白、鑰孔血藍(lán)蛋白、甲狀腺蛋白、人血清白蛋白。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的利巴韋林人工抗原，其特征在于，所述載體蛋白為牛血清白蛋白或鑰孔血藍(lán)蛋白。

5.權(quán)利要求3或4所述人工抗原的制備方法，其特征在于，采用活化酯法將載體蛋白偶聯(lián)于權(quán)利要求1所述半抗原的羧基碳上。

6.權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，式(I)所示化合物與載體蛋白的偶聯(lián)摩爾比為9.6:1。

7.權(quán)利要求1所述半抗原或權(quán)利要求3或4所述人工抗原的以下任一應(yīng)用：

①在制備抗利巴韋林特異性抗體中的應(yīng)用；

②在檢測(cè)抗利巴韋林特異性抗體中的應(yīng)用。

8.由權(quán)利要求3或4所述人工抗原制備的特異性抗體，所述特異性抗體為多克隆抗體或單克隆抗體。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的特異性抗體，其特征在于，所述特異性抗體為多克隆抗體。

10.由權(quán)利要求8或9所述特異性抗體制備的利巴韋林檢測(cè)試劑或試劑盒。

11.權(quán)利要求8或9所述特異性抗體的以下任一應(yīng)用：

(1)在檢測(cè)利巴韋林中的應(yīng)用；

(2)在制備利巴韋林的免疫層析試紙條中的應(yīng)用；

(3)在制備利巴韋林的膠體金檢測(cè)試紙條中的應(yīng)用。