[發明專利]類胰腺結構體及其構建方法與應用

有效

• 申請號: 201811367046.1
• 申請日: 2018-11-16
• 公開（公告）號: CN111197024B
• 公開（公告）日: 2023-08-18
• 發明（設計）人: 姚睿;徐銘恩
• 申請（專利權）人: 杭州捷諾飛生物科技股份有限公司;清華大學
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12N5/0775;A61L27/38;A61L27/22;A61L27/20;A61L27/24;A61L27/16;A61L27/18;A61L27/52
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;黃爽

1.類胰腺結構體的構建方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

A、類胰腺細胞團的制備：將干細胞和/或祖細胞在體外誘導分化為類胰腺細胞團；

B、將血管化細胞、步驟A制備的類胰腺細胞團與水凝膠材料混合后進行生物打印，得到預凝膠三維結構體；

C、采用多細胞培養液和/或生物反應器培養預凝膠三維結構體，即得類胰腺結構體；

其中，步驟C所述多細胞培養液中含有如下物質中的至少一種：2-mercaptoethanol、5-AZA、amphotericin?B、Activin-A、ascorbic?acid、all-trans?retionic?acid、activin-βB、β-cellulin、bovine?pituitary?extract、BSA、BSA?Cohn?fraction?V、butylatedhydroxyanisole、B-27、CHIR99021、DAPT、DMSO、Dibutyryl-cAMP、dorsomorphin、EGF、EnGS、ES-qualified?fetal?calf?serum、Exendin-1、Exendin-4、fibronectin、FGF家族、gentamicin、GLP-1、GA-1000、HEPES、heparin、Hydrocortisone、HGF、IGF-1、IGF-2、insulin、IndolactamV、KAAD-cyclopamine、LiCl、L-glutamine、laminin、nicotinic?acid、Nicotinamide、N-2、non-essential?amino?acids、noggin、PDGF、Pentagastrin、γ-secretase?inhibitor、selenium、sodium?butyrate、sodium?pyruvate、sodium?chlorate、SB431542、TGF-β1、TGF-β3、transferrin、taurine、trolox、TSA、VEGF、Wnt3a、Zn₂SO₄；

步驟A中采用預分化培養液培養所述干細胞和/或祖細胞，使其分化為類胰腺細胞團；

所述預分化培養液中含有如下物質中的至少一種：Nicotinamide、Activin-A、Exendin-4、Pentagastrin、HGF、EGF、VEGF、FGF家族、TGF-β1、TGF-β3、IGF-1、IGF-2、BSA、BSACohn?fraction?V、insulin、transferrin、selenium、sodium?butyrate、sodium?pyruvate、2-mercaptoethanol、taurine、GLP-1、B-27、N-2、non-essential?amino?acids、CHIR99021、LiCl、all-trans?retionic?acid、dorsomorphin、SB431542、KAAD-cyclopamine、ascorbicacid、DAPT、Dibutyryl-cAMP、Wnt3a、noggin、activin-βB、trolox、sodium?chlorate、γ-secretase?inhibitor、L-glutamine、fibronectin、laminin、Zn₂SO₄、HEPES、Exendin-1、ES-qualified?fetal?calf?serum、IndolactamV、nicotinic?acid、heparin、5-AZA、TSA、β-cellulin、DMSO、butylated?hydroxyanisole；

步驟A中所述干細胞或祖細胞選自誘導性多能干細胞、成體干細胞、骨髓干細胞、臍帶血干細胞、周邊血干細胞、造血干細胞、胰腺干細胞、胰腺祖細胞中的至少一種；

步驟B中所述血管化細胞選自血管內皮細胞、血管內皮祖細胞、微血管內皮細胞、血管平滑肌細胞、血管成纖維細胞、間充質干細胞、周細胞中的至少一種；

其中，所述血管化細胞是組織中提取獲得的，或者由干細胞分化而來的。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述干細胞為成體干細胞、胰腺祖細胞。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述血管化細胞為血管內皮細胞、血管內皮祖細胞。