[發明專利]三維打印技術在角膜緣組織體外建立三維結構數字化模型

有效

• 申請號: 201811366272.8
• 申請日: 2018-11-16
• 公開（公告）號: CN109859304B
• 公開（公告）日: 2023-08-04
• 發明（設計）人: 王瑋;李貴剛;徐玲娟;李陽;王云明
• 申請（專利權）人: 華中科技大學同濟醫學院附屬同濟醫院
• 主分類號: G06T17/00
• 分類號: G06T17/00
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司 42104
• 代理人: 胡鎮西;馮超

1.一種基于三維打印技術體外建立角膜緣組織的三維結構數字化模型的方法，其特征在于：包括以下步驟：

1)標本固定

選取完整保留角膜及角膜緣組織的標本，將標本置于固定液中固定；

2)組織包埋及切片

a.將標本用濾紙包裹好后，首先將標本依次放入體積分數為75％、85％、95％和100％的乙醇中各脫水4h，然后浸入二甲苯I中，再浸入二甲苯II中直至透明；

b.將標本放入電烤爐的液體蠟I中透蠟，再在液體蠟II中透蠟；將標本取出放入包埋框中，待蠟油固定后放入水中冷卻成形，修整蠟塊，以垂直于角膜做連續切片，將裱好的切片置于染色架上并依次編號；其中，切片的數量為80～200片，切片厚度為3～6μm；

3)HE染色

a.以每間隔2張的順序選取編號為1、4、7、10、14……的切片，放入烤箱中烘烤；

b.將上述所有切片依次放入二甲苯I和二甲苯II液中浸泡，然后：將切片依次放入體積分數為100％、95％和85％的乙醇中各1分鐘浸泡，再用水沖洗；c.首先將切片浸入蘇木素染液中，水沖洗；然后浸入鹽酸乙醇中，水沖洗；再氨水返藍，水沖洗；浸入伊紅溶液中，水沖洗；

d.首先將將切片依次放入體積分數為75％、85％、95％和100％的乙醇中各脫水1～2min，然后依次放入二甲苯I和二甲苯II中透明化，再中性樹膠封固切片標本并按序號依次排列；

4)圖像采集、數字化和三維重建

a.光學顯微鏡下觀察HE染色后的角膜緣結構，通過40倍視野找到角膜緣，利用相關照相軟件采集每張切片的原圖并依次編號；

b.將光學顯微鏡轉換成200倍視野，重新采集每張切片的角膜緣組織圖像并依次編號；由于高倍鏡下無法采集角膜緣組織的完整顯微照片，只需保證每張照片上有角膜緣的上皮細胞層及下方的部分基質層；

c.通過Adobe?PhotoShop軟件將40倍視野照片放大5倍作為比照，在同一切片的200倍視野照片上的相同部位畫上三角形；

d.以上述三角形作為定位標準軸，將所有200倍視野照片旋轉對齊后重新裁剪，并以tiff文件格式保存，保證所有照片的三角都在同一位置；

e.按順序將裁剪后的圖片導入Unigraphics?NX軟件，將每張圖片上的上皮細胞層和基質層的邊界描繪出來，選擇重建的層厚，以此層厚將保存的草圖進行等間距分開，通過Unigraphics?NX將草圖按照順序進行三維重建，得到角膜緣組織的三維結構數字化模型。

2.根據權利要求1所述基于三維打印技術體外建立角膜緣組織的三維結構數字化模型的方法，其特征在于：所述步驟3)第c小步中，鹽酸乙醇的質量分數為1～3％，伊紅溶液質量分數為0.1～1.0％。

3.根據權利要求1所述基于三維打印技術體外建立角膜緣組織的三維結構數字化模型的方法，其特征在于：所述步驟4)第e小步中，Unigraphics?NX軟件中的層厚調整為9*200＝1800μm＝1.8mm。