[發明專利]以葉柄為外植體的河北楊組織培養方法

在審

• 申請號: 201811364908.5
• 申請日: 2018-11-15
• 公開（公告）號: CN111183898A
• 公開（公告）日: 2020-05-22
• 發明（設計）人: 白玉娥;包文泉;代金玲;托亞;哈布爾;白皓;劉百超
• 申請（專利權）人: 內蒙古農業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供了以葉柄為外植體的河北楊組織培養方法，經過外植體消毒、愈傷組織誘導、愈傷組織分化不定芽、不定芽生根培養獲得再生植株。本發明中愈傷組織分化率達93.7％，不定芽生根率高達100％，顯著提高了組織培養獲得再生植株的效率，為河北楊工廠化育苗及遺傳改良研究奠定了基礎。

技術領域

本發明屬于林業無性繁殖技術領域，涉及以葉柄為外植體進行組織培養的技術。

背景技術

河北楊(Populus hopeiensis)又名椴楊、青楊等，是楊柳科楊屬白楊派樹種。河北楊生長迅速、耐寒、耐旱、根深、側根發達、萌蘗力強，是水土保持、防風固沙和綠化造林優良樹種。目前，扦插繁殖是河北楊繁育中最常采用，但存在生根難，成活率低等問題，無法滿足對河北楊這一優良樹種苗木的需求。河北楊組織培養的報道最早為1980年，林靜芳等以河北楊莖段、葉柄、葉片為外植體進行了再生體系的初步研究，雖然獲得了完整植株并移栽成活，但是并沒有公布具體的培養方法和條件。之后的研究中均以莖段和葉片為外植體，再無以葉柄為外植體的研究報道。以葉柄為外植體，取材方便、材料豐富、操作簡單，誘導的愈傷組織可分化大量不定芽，不定芽生根快且生根率高、植株再生過程中繁殖率高，河北楊高效組織培養再生體系的建立，為其工廠化育苗和遺傳改良研究奠定了基礎。

發明內容

本發明旨在發明一種以河北楊葉柄為外植體，在1/2MS培養基附加不同濃度6-BA、NAA、IBA來進行愈傷組織誘導、愈傷組織分化、不定芽生根及組培苗擴繁，實現河北楊高效再生體系的建立。

本發明是通過如下步驟實現的：

(1)選用河北楊葉柄為外植體，置于三角瓶中，加2滴吐溫20，流水下沖洗1h。在超凈工作臺中，葉柄用75％酒精消毒30s，無菌水洗3次，0.1％HgCl₂消毒6min，無菌水沖洗5次，2％NaClO消毒2min，無菌水沖洗8次，置于無菌濾紙上吸干水分。

(2)將經步驟(1)消毒后的葉柄切成1cm小段，接種于下列培養基中：MS+6-BA0.3～1.0mg/L+NAA0.2～0.6mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂6g/L，pH控制在5.8～6.0，溫度為25±1℃，暗培養15d形成愈傷組織。

(3)將步驟(2)形成的愈傷組織接種于下列培養基中：MS+6-BA0.3～1.0mg/L+NAA0.2～0.6mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂6g/L，pH控制在5.8～6.0，溫度為25±1℃，光照強度2500Lx，光照時間12h/d，誘導愈傷組織分化形成不定芽。

(4)將步驟(3)獲得不定芽接種于下列培養基中：1/2MS+IBA0.3～0.6mg/L+NAA0.05～0.1mg/L+蔗糖30g/L+瓊脂6g/L，pH控制在5.8～6.0，溫度為25±1℃，光照強度2500Lx，光照時間12h/d，進行生根培養，培養30d獲得生長健壯的組培苗。

本發明方法的優勢在于：以葉柄為外植體建立了河北楊離體培養再生體系，愈傷組織分化獲得大量叢生芽，愈傷分化率可達93.7％，生根率高達100％。培養過程便于操作和控制，能夠有效滿足對河北楊組培苗的需求，且本發明對離體快速繁殖和遺傳改良有重要意義。

附圖說明

圖1為葉柄形成愈傷組織分化不定芽圖。

圖2為葉柄形成叢生芽圖。

圖3為不定芽生根圖。

具體實施方式

以下結合實施例對本發明做進一步的詳細描述，但并非對本發明的限制，凡依照本發明公開內容所做的任何本領域的等同替換，均屬本發明的保護范圍

實施例1