[發明專利]一種利用拉曼光譜檢測細胞培養基中葡萄糖含量的方法

在審

• 申請號: 201811360944.4
• 申請日: 2018-11-15
• 公開（公告）號: CN109342393A
• 公開（公告）日: 2019-02-15
• 發明（設計）人: 楊小蓉;馬良;許磊;李曉冉
• 申請（專利權）人: 中牧實業股份有限公司
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;王文紅

本發明提供一種利用拉曼光譜檢測細胞培養基中葡萄糖含量的方法，包括以下步驟：1)用葡萄糖配制濃度從0.1g/L至350g/L的系列標準葡萄糖溶液，置于拉曼光譜儀的比色皿中，設定激光投射距離為1～2mm，利用拉曼光譜儀采集光譜信號；2)以不同濃度標準葡萄糖溶液拉曼光譜的特征峰與濃度建立標準模型。本發明用拉曼光譜檢測細胞培養基中葡萄糖的含量的方法，應用于獸醫細胞培養基檢測領域，不存在血紅蛋白干擾因素；同時通過拉曼光譜距離和波長時間的調節，排除了干擾因素。相比于獸用生物制品領域現有葡萄糖溶液檢測技術，本發明具有快速、簡便、準確、靈敏的特點。

技術領域

本發明屬于檢測技術領域，具體涉及一種用拉曼光譜檢測葡萄糖含量的方法。

背景技術

目前在獸用生物制品領域，檢測培養基等樣品中葡萄糖含量的方法主要是利用血糖儀或者生化分析儀等儀器設備取樣檢測。葡萄糖是微生物生長中重要的碳源，但必須控制其濃度，培養基中有葡萄糖存在時，微生物利用乳糖的能力即受到抑制。所以培養基中葡萄糖含量需要實時的定量檢測。但現有的葡萄糖檢測方法，存在操作偏繁瑣，耗費耗材多，耗時長等缺點。

拉曼光譜是一種散射光譜，基于光被分子散射的發生的頻率變化來獲得分子結構方面的信息。

專利CN201610994505.3公開了一種葡萄糖的檢測方法，需要用銀納米材料和葡萄糖氧化酶構建檢測體系，加入到樣品中。申請號為CN201610450103.7的專利—基于表面增強拉曼散射和雙分子探針的葡萄糖檢測方法，所描述的葡萄糖檢測方法需要對樣品經過復雜的前處理。申請號為CN201310254285.7的專利提出一種利用SERS技術間接檢測血清中葡萄糖含量的方法，所描述的葡萄糖檢測方法需要進行復雜的樣品前處理，向樣品中加入顯色底物等，不是無損的檢測。專利《用于通過拉曼光譜進行無創傷性活體測量的設備》(申請號：201180005627.0)描述的是檢測葡萄糖檢測裝置，對方法沒有具體的描述。

雖然拉曼光譜檢測已在多個領域中應用，但對于像細胞培養基這樣成分復雜的對象，還不能實現對樣品完全無損的定量檢測。

發明內容

針對本技術領域存在的不足之處，本發明的目的是提出一種利用拉曼光譜檢測細胞培養基中葡萄糖含量的方法。本發明檢測細胞培養基中葡萄糖的含量，具有快速、簡便、準確、靈敏的特點，不需要對樣品進行前處理，對樣品無損耗，同時避免了對實驗試劑的耗費。

實現本發明上述目的技術方案為：

一種利用拉曼光譜檢測細胞培養基中葡萄糖含量的方法，包括以下步驟：

1)用葡萄糖配制濃度從0.1g/L至350g/L的系列標準葡萄糖溶液，置于拉曼光譜儀的比色皿中，設定激光投射距離為1～2mm，利用拉曼光譜儀采集光譜信號；

2)以不同濃度標準葡萄糖溶液拉曼光譜的特征峰與濃度建立標準模型。

進一步地，用葡萄糖配制濃度從0.1g/L至320g/L的系列標準葡萄糖溶液，濃度梯度為0.4～10g/L。

本發明的優選技術方案為，所述拉曼光譜儀采集光譜信號的參數為：積分時間25000ms，平均次數3次，激光開關頻率100。

其中，步驟2)所述的特征峰為扣除暗電流和背景后，強度為6.41×10⁴～0.21×10⁴的峰。

進一步地，選取拉曼位移293.5～1775、2780～2992cm-1處的峰為特征峰。

標準模型的制定可采用光譜儀配套的軟件進行。其中，所述標準曲線的最低檢出濃度為0.1g/L，最高檢出濃度為350g/L。

所述的方法，還包括步驟：將培養基的樣品置于拉曼光譜儀的比色皿中，采用和步驟1)相同的方法測定拉曼光譜，代入所述標準模型，獲得所述培養基的樣品中葡萄糖的含量。