[發明專利]基于碳量子點熒光猝滅法定量檢測維生素B12

有效

• 申請號: 201811360675.1
• 申請日: 2018-11-15
• 公開（公告）號: CN109456761B
• 公開（公告）日: 2022-01-28
• 發明（設計）人: 弓曉娟;張俐;董文娟;宋勝梅;董川
• 申請（專利權）人: 山西大學
• 主分類號: C09K11/65
• 分類號: C09K11/65;G01N21/64
• 代理公司: 太原晉科知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 14110
• 代理人: 任林芳

本發明屬于熒光探針技術領域，提供一種基于碳量子點熒光猝滅法定量檢測維生素B₁₂的熒光探針及其制備方法和應用。以蔗糖作為碳源，乙二胺作為氮源，濃磷酸作為磷源，通過酸堿中和放熱碳化法制備PNCQDs，離心除去不溶物，透析去除未反應的前體物質和小分子，冷凍干燥得到熒光探針PNCQDs固體粉末；利用熒光檢測法確定維生素B₁₂濃度與PNCQDs熒光強度之間的線性關系。通過加標回收實驗檢測實際樣品中維生素B₁₂的含量。操作簡便，抗干擾性強，不需要昂貴的儀器設備，檢測成本低，可快速、高效、定量檢測實際樣品中維生素B₁₂的含量。

技術領域

本發明屬于熒光探針技術領域，具體涉及一種基于碳量子點熒光猝滅法定量檢測維生素B₁₂的熒光探針及其制備方法和應用。

背景技術

維生素B₁₂（Vitamin B₁₂，VB₁₂）又稱鈷胺素或氰鈷素，是一種由含鈷的卟啉類化合物組成的B族維生素。VB₁₂也是唯一含必需礦物質的維生素，因含鈷而呈紅色，又稱紅色維生素，是少數有色的維生素，也是維持人體正常機能以及新陳代謝必不可少的維生素。當成人缺乏VB₁₂時會引起惡性貧血，舌、口腔、消化道的粘膜發炎，脊髓變性，神經和周圍神經退化；小孩缺乏VB₁₂的早期表現為精神情緒異常、表情呆滯、少哭少鬧、反應遲鈍、愛睡覺等癥狀，最后會引起貧血，另外，缺乏VB₁₂可能引起精神憂郁。然而，當VB₁₂過量時，人體會發生哮喘、蕁麻疹、濕疹、面部浮腫、寒顫等過敏反應，也可能引發神經興奮、心前區痛和心悸，還可導致葉酸缺乏。

目前已報道的檢測VB₁₂的方法有：微生物法、原子吸收分光光度法、高效液相色譜法以及液相色譜質譜聯用系統。這些方法有自身獨特的優勢，但都存在以下缺陷：步驟繁瑣，耗時費力，儀器裝置復雜昂貴，檢測周期長，技術含量高，成本高，抗干擾能力弱以及準確度低等，導致這些檢測方法無法得到廣泛應用。因此，亟需發展一種快速、高效、定量檢測VB₁₂的方法。

碳量子點又稱為碳納米點，是碳家族中新型成員，具有光致發光性能，良好的水溶性和穩定性，生物相容性以及低細胞毒性等優點。基于碳量子點已經構筑了多種熒光探針用于各種金屬離子、氨基酸、藥物和環境污染物等的檢測。以其為基礎，通過熒光猝滅法，發展一種快速、高效、定量檢測VB₁₂的方法具有重要的意義和廣闊的應用前景。

發明內容

本發明的目的在于提供一種基于碳量子點熒光猝滅法定量檢測VB₁₂的熒光探針及其制備方法和應用。

本發明由如下技術方案實現的：一種基于碳量子點熒光猝滅法定量檢測VB₁₂的熒光探針，以蔗糖作為碳源，乙二胺作為氮源，濃磷酸作為磷源，通過酸堿中和放熱碳化法制備PNCQDs，離心除去不溶物，透析去除未反應的前體物質和小分子，冷凍干燥得到熒光探針PNCQDs固體粉末；所述熒光探針的具體制備方法如下：(1)前體物質的獲得：稱量0.4 g蔗糖，向其中加6 mL乙二胺和4 mL濃磷酸，通過酸堿中和放熱碳化法得到深褐色黏稠物；（2）待反應體系溫度冷卻至室溫后，將深褐色黏稠物溶解于二次水中，溶液8000轉/分鐘離心15分鐘，上清液在500-1000 Da的透析袋中透析處理三天，透析袋中的溶液冷凍干燥，即得PNCQDs固體粉末。

所述濃磷酸為市售的85%的濃磷酸，濃度14.6 mol/L。

利用所述的基于碳量子點熒光猝滅法定量檢測VB₁₂的熒光探針檢測VB₁₂的方法，具體步驟為：

（1）PNCQDs儲備液的制備：0.5 g PNCQDs固體粉末中加入50 mL二次水，攪拌使其充分溶解得到濃度為10 mg/mL的PNCQDs儲備液；