[發明專利]檢測阿爾茨海默癥基因突變的引物組及試劑盒

在審

• 申請號: 201811359851.X
• 申請日: 2018-11-15
• 公開（公告）號: CN109234385A
• 公開（公告）日: 2019-01-18
• 發明（設計）人: 張惠丹;戴敬;李陽;孫培亞
• 申請（專利權）人: 蘇州繪真生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 蘇州中合知識產權代理事務所(普通合伙) 32266
• 代理人: 趙曉芳

本發明提供了一種檢測阿爾茨海默癥基因突變的引物組及試劑盒，設計了4組針對阿爾茨海默癥相關基因不同位點的引物組，本發明所用質譜檢測平臺操作更加簡便，并可以同時檢測每份樣本DNA的多個位點以及對檢測結果進行實時監控和評價，且結果判定方式更加簡單直觀，同時具有操作簡便，相對單個樣品成本較低等諸多優勢，同時多基因多位點分析，可以更準確的評估阿爾茨海默癥的發病風險。

技術領域

本發明涉及分子生物學技術領域，特別是涉及一種檢測阿爾茨海默癥基因突變的引物組及試劑盒。

背景技術

阿爾茨海默癥(Alzheimer disease，AD)是一種病因未明的起病隱匿的進行性發展的神經系統退行性疾病。臨床上主要表現為記憶障礙、失語、失用、失認、視空間技能損害、執行功能障礙以及人格和行為改變等全面性癡呆的特征。該病可能是一組異質性疾病，在多種因素(包括生物和心理因素)的作用下才發病。從目前研究來看，該病的可能因素和假說多達30余種，如家族史、頭部外傷、教育水平較低、甲狀腺病、母育齡過高或過低、病毒感染等。根據發病時間，可以分為早老性癡呆(65歲前發病者)和老年性癡呆(65歲后發病者)，且女性發病高于男性發病，女性發病約為男性發病的3倍。

由于該病起病緩慢或隱匿，病人及家人常說不清何時起病，不能及時的預防或減緩發病的時間。目前，檢測AD的手段主要集中在神經心理學檢驗、血液檢查、神經影像檢查、腦電圖、腦脊液檢測，但這些檢測手段的檢測過程繁復、成本高，且只能在有發病征兆或發病初期檢測出AD。

據目前研究結果顯示，基因檢測可以為AD診斷提供參考。目前，在國際上已經有四個AD致病基因和易感基因被確定以及認可，分別為蛋白前體蛋白(APP)基因、早老蛋白-1(PSEN1)基因、早老蛋白(PSEN2)-2基因和載脂蛋白E(APOE)基因。在家族性早發型AD中發現有50％的人群攜帶APP、PS1、PS2的突變，在晚發型AD病人中，攜帶APOE4基因的頻率增多。基因檢測可以從根源上預測AD的發病概率，從而做到早發現，早預防。

APP位于染色體21q21.1-21.3，14％的EOAD是由該基因的突變所引起的，研究發現rs1800557為EOAD的一個致病突變位點；PSEN1位于染色體14q24.3，PSEN2位于染色體1q31-Q42，它們編碼的蛋白是γ－分泌酶復合體的重要組成部分。研究發現，約80％的家族性EOAD患者中攜帶PSEN1的突變，約5％的家族性EOAD患者檢測到PSEN2發生突變。最近研究發現PSEN1rs17125721和PSEN2rs28936379突變是AD的致病因素；APOE4位于染色體19q13.2，編碼的載脂蛋白E是脂蛋白代謝的調節因子，在中樞神經系統內與膽固醇轉運、神經可塑性、炎癥反應等有關。是目前認為與LOAD發病風險關聯性最強的基因，rs429358是LOAD發病相關的一個位點。

近年來分子診斷技術發展迅速，基因測序手段日益發展，在AD基因診斷技術應用過程中，熒光定量PCR是當前比較常用的阿爾茨海默癥基因檢測方法，但其檢測過程只能檢測單個基因位點，單次檢測樣本量小，從而對阿爾茨海默癥的診斷分析造成誤差。因此，檢測技術還是以質譜檢測為主，該技術主要檢測的是中國人群阿爾茨海默癥的致病基因突變。

發明內容

針對上述問題，本發明的目的在于提供一種檢測阿爾茨海默癥基因突變的引物組及試劑盒，在采用質譜檢測方法檢測人體DNA中的阿爾茨海默癥相關致病基因是否突變時，具有可操作性強、靈敏度和準確度高、節省時間等優點。

為了實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

一種檢測阿爾茨海默癥基因突變的引物組，包括：

檢測APP基因rs1800557位點的擴增引物和單堿基延伸引物，所述擴增引物又包括具有SEQ ID NO：1序列的上游引物和具有SEQ ID NO：2序列的下游引物，所述單堿基延伸引物具有SEQ ID NO：3的序列；