[發明專利]利用中空纖維反應器進行單細胞體外初代培養的方法

在審

• 申請號: 201811355205.6
• 申請日: 2018-11-14
• 公開（公告）號: CN109486743A
• 公開（公告）日: 2019-03-19
• 發明（設計）人: 賴俊凱;陳仲奇;陳獻堂;趙美玲
• 申請（專利權）人: 蘇州致諾優生物醫學有限公司
• 主分類號: C12N5/02
• 分類號: C12N5/02;C12N5/09;C12N5/0786
• 代理公司: 北京聯瑞聯豐知識產權代理事務所(普通合伙) 11411
• 代理人: 黃冠華

本發明公開了一種利用中空纖維反應器進行單細胞體外初代培養的方法，包括如下步驟：1)將中空纖維反應器滅菌處理；2)分離單細胞；3)將分離的單細胞植入中空纖維反應器內，封口，將中空纖維反應器放入培養皿中，并加入培養基，培養1～20天后，取單核細胞進行活性測試。本發明提供一種利用中空纖維反應器進行單細胞體外初代培養的方法，其具有細胞培養時間短，細胞存活率高，細胞保存時間久的優點；中空纖維反應器包括多根平行排列的中空纖維管或者為多根中空纖維管組成的纖維束，每個中空纖維管表面均設有多個孔洞，有利于細胞培養時養分傳送，提高細胞成活率和生長速度。

技術領域

本發明涉及細胞培養技術領域，特別涉及一種利用中空纖維反應器進行單細胞體外初代培養的方法。

背景技術

目前進行細胞體外初代培養的方式是利用培養皿進行體外培養，培養皿屬于平面培養而且細胞在在液體中的漂浮過程不易和彼此接觸，導致體外初代培養成功率非常低。

發明內容

針對上述現有的細胞體外初代培養成功率低的問題，本發明提供一種利用中空纖維反應器進行單細胞體外初代培養的方法。

為了解決上述技術問題，本發明采用的技術方案是：

一種利用中空纖維反應器進行單細胞體外初代培養的方法，其中，包括如下步驟：

1)采用醋酸電漿將中空纖維反應器表面改質10～30min，滅菌處理5～ 10min；

2)分離單細胞；

3)將分離的單細胞植入中空纖維反應器內，封口，將中空纖維反應器放入培養皿中，并加入培養基，培養1～20天后，取單細胞進行活性測試。

優選的是，所述的利用中空纖維反應器進行單細胞體外初代培養的方法，其中，所述單細胞選自單核細胞或腫瘤細胞。

優選的是，所述的利用中空纖維反應器進行單細胞體外初代培養的方法，其中，所述單核細胞的分離具體為：采用聚蔗糖密度梯度離心法從全血分離；所述腫瘤細胞的分離具體為：采用酵素將腫瘤樣本分解成腫瘤細胞。

優選的是，所述的利用中空纖維反應器進行單細胞體外初代培養的方法，其中，所述中空纖維反應器包括多根平行排列的中空纖維管。

優選的是，所述的利用中空纖維反應器進行單細胞體外初代培養的方法，其中，所述中空纖維反應器包括由多根中空纖維管組成的纖維束。

優選的是，所述的利用中空纖維反應器進行單細胞體外初代培養的方法，其中，所述中空纖維管的直徑為70～100μm，壁厚為2～4μm，長度為3～5cm。

優選的是，所述的利用中空纖維反應器進行單細胞體外初代培養的方法，其中，每個所述中空纖維管表面均設有多個孔洞，所述孔洞的直徑為100～ 300nm。

優選的是，所述的利用中空纖維反應器進行單細胞體外初代培養的方法，其中，所述培養基為RPMI-1640。

優選的是，所述的利用中空纖維反應器進行單細胞體外初代培養的方法，其中，所述活性測試具體為：

1)將中空纖維反應器浸泡于2ml的第一移液器中，第一移液器中含有200μ l0.5％噻唑藍溶液和1000μl磷酸鹽緩沖溶液，中空纖維反應器避光保存30min，離心分離出單細胞；

2)將中空纖維反應器置于含有500μl二甲基亞砜的2ml第二移液器，避光保存24h；

3)取經步驟2)處理的細胞溶液100μl至于96孔盤，測定570nm吸光度值，以判斷細胞培養的存活率。

有益效果：