[發(fā)明專利]白鮮皮中抗癌活性部位的制備方法、含量測(cè)定方法及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811350892.2
• 申請(qǐng)日: 2018-11-14
• 公開（公告）號(hào): CN109394870B
• 公開（公告）日: 2021-03-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王磊;劉貴棟;單林
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 哈爾濱職業(yè)技術(shù)學(xué)院
• 主分類號(hào): A61K36/75
• 分類號(hào): A61K36/75;A61P35/00;G01N30/02
• 代理公司: 南京燦爛知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32356
• 代理人: 趙麗

1.一種白鮮皮抗胃癌活性部位的制備方法，其特征在于，該活性部位總生物堿含量為60%以上，并含有白鮮堿、茵芋堿、白鮮明堿、r-崖椒堿和前茵芋堿，包含以下步驟：

(1)提?。喝“柞r皮粉碎，加入乙醇水溶液回流提取3～5次，過濾，合并濾液，濃縮，得到濃縮浸膏；

（2）萃取：將上述濃縮浸膏加水混懸后，加稀酸將pH值調(diào)節(jié)至2～4，放置過夜，取上清液過濾，用10％NaOH溶液將上述濾液pH調(diào)至9～10后，用有機(jī)溶劑萃取3～5次，合并有機(jī)溶劑層，濃縮后得到萃取部位濃縮浸膏；有機(jī)溶劑為二氯甲烷或氯仿；

（3）除雜：大孔樹脂柱層析，將上述萃取部位濃縮浸膏用1:1～1:2的純水溶解后，進(jìn)行大孔樹脂吸附，然后先用3～5倍柱體積的純水洗脫除去水溶性雜質(zhì)；再用1～3倍柱體積的體積分?jǐn)?shù)為20～40％的乙醇水溶液洗脫除雜；最后用3～5倍柱體積的體積分?jǐn)?shù)為60～80％的乙醇水溶液洗脫；收集體積分?jǐn)?shù)為60～80％的乙醇水溶液洗脫部位，濃縮干燥得大孔樹脂柱層析活性部位；

（4）純化：用制備液相色譜繼續(xù)分離得到的洗脫液，分離條件：色譜柱為Agilent 制備柱 Zorbax SB-C18 ；21.2mm×250mm，流動(dòng)相為甲醇-0.1%三氟乙酸水溶液，進(jìn)行梯度洗脫，所述梯度洗脫程序如下 ：0-30min，甲醇相從30%升為50%，30-47min，甲醇相從50%升為60%，47-60min，甲醇相從60%升為95%；流速為10ml/min，柱溫為室溫；樣品用色譜級(jí)甲醇溶解，經(jīng)制備液相色譜分離，在時(shí)間段8-18分鐘收集溶液，收集液濃縮干燥后得到白鮮皮抗癌活性部位。

2.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，提取步驟中的乙醇溶液為70%～85％乙醇水溶液，用量為生藥重量體積比2.5～3倍量，加熱回流時(shí)間為2～4小時(shí)，浸膏濃縮至無醇味。

3.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，萃取步驟中水的用量為浸膏的2～3倍量，萃取用有機(jī)溶劑用量與水等體積；萃取步驟中稀酸為0.1%~l%的硫酸或鹽酸溶液。

4.一種白鮮皮抗胃癌活性部位的制備方法，其特征在于，將權(quán)利要求1所述的制備方法中步驟（4）的制備液相色譜替換為硅膠柱層析，即將除雜步驟中制備得到大孔樹脂柱層析活性部位上硅膠柱進(jìn)行層析柱分離，先用3～5倍柱體積的氯仿洗脫除雜；然后再用3～6倍柱體積的體積比為98:2～85:15的氯仿和甲醇組成的混合溶劑體系進(jìn)行洗脫并收集該洗脫部位，濃縮干燥后即得所述的白鮮皮抗癌活性部位。

5.采用權(quán)利要求1~4任意一項(xiàng)所述制備方法獲得的白鮮皮抗胃癌活性部位的主成分含量測(cè)定方法，其特征在于，包括以下步驟：（1）供試品制備：精密稱取10.0mg白鮮皮中抗癌活性部位，用色譜純甲醇溶解且定容至10ml容量瓶中，用0.45微米微孔濾膜過濾，即得到白鮮皮抗癌活性部位供試品；

（2）：對(duì)照品溶液制備：精密稱定經(jīng)干燥過的白鮮堿、茵芋堿、白鮮明堿、r-崖椒堿和前茵芋堿對(duì)照品各5.0mg，置10mL的量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，制成白鮮皮生物堿混合對(duì)照品儲(chǔ)備液，?4 ℃冰箱放置，備用；

（3）：對(duì)步驟（1）制備的供試品進(jìn)行高效液相色譜測(cè)定，并以步驟（2）制備白鮮堿、茵芋堿、白鮮明堿、r-崖椒堿和前茵芋堿對(duì)照品進(jìn)行含量測(cè)定；HPLC條件為：色譜柱填料為Aglient C18，規(guī)格為250mm×4.6mm 5μm，波長(zhǎng)為240nm，流動(dòng)相為乙腈-0.1％三氟乙酸水溶液，梯度洗脫為：0-30min，乙腈相從15%升為30%，30-47min，乙腈相從30%升為40%，47-60min，乙腈相從40%升為95%，60-70min，乙腈相95%等度洗脫；流速為1ml/min，柱溫為30℃。