[發(fā)明專利]一種慢性創(chuàng)面修復(fù)基質(zhì)的制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811350056.4
• 申請日: 2018-11-14
• 公開（公告）號: CN109529106B
• 公開（公告）日: 2021-09-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 不公告發(fā)明人
• 申請（專利權(quán)）人: 山東雋秀生物科技股份有限公司
• 主分類號: A61L27/02
• 分類號: A61L27/02;A61L27/36
• 代理公司: 濟(jì)南圣達(dá)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37221
• 代理人: 鄧建國

本發(fā)明公開了一種慢性創(chuàng)面修復(fù)基質(zhì)的制備方法，包括如下步驟：（1）取3~5月齡胎牛皮，剪碎，經(jīng)凍融、超聲波結(jié)合化學(xué)洗脫等處理，去除其中的細(xì)胞結(jié)構(gòu)及其它免疫原物質(zhì)；（2）采用靜電紡絲技術(shù)，將去細(xì)胞胎牛皮細(xì)胞外基質(zhì)和蒙脫石粉制成微球，低溫干燥制成一種慢性創(chuàng)面修復(fù)基質(zhì)。本發(fā)明制得的慢性創(chuàng)面修復(fù)基質(zhì)能夠有效吸收創(chuàng)面深處，保持創(chuàng)面清潔，同時，胎牛皮細(xì)胞外基質(zhì)含有的活性生物因子有助于組織再生修復(fù)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于醫(yī)用生物材料、組織工程修復(fù)領(lǐng)域，具體涉及一種慢性創(chuàng)面修復(fù)基質(zhì)及其制備方法。

背景技術(shù)

伴隨人口老齡化以及全球范圍內(nèi)糖尿病、肥胖的增加，慢性創(chuàng)面的發(fā)病率也日益增高，臨床上常見的慢性創(chuàng)面有創(chuàng)傷感染、壓瘡、糖尿病潰瘍、靜脈性潰瘍等等。慢性創(chuàng)面受組織缺氧、缺血、感染、局部生長因子數(shù)量減少、自身免疫力低下等的影響，愈合周期長，甚至常年不愈，給患者的生活帶來了極大的影響。組織工程化基質(zhì)的出現(xiàn)為慢性創(chuàng)面治療提供了新的解決途徑。

組織工程是以細(xì)胞生物學(xué)和材料科學(xué)為基礎(chǔ)，多學(xué)科交叉的新型科學(xué)，其核心要素為細(xì)胞、支架和生長信息，其中一個好的支架可為細(xì)胞移植、損傷修復(fù)提供良好的載體。脫細(xì)胞真皮基質(zhì)（ADM）是將真皮組織通過一系列物理化學(xué)及生物學(xué)方法去除表皮及皮內(nèi)具有免疫原性的細(xì)胞成分，保留膠原等細(xì)胞外基質(zhì)成分與結(jié)構(gòu)，得到的一種具有三維空間結(jié)構(gòu)的膠原基質(zhì)材料。大量研究已經(jīng)證實(shí)，ADM具有可誘導(dǎo)組織再生性，可為細(xì)胞提供生存及活動的微環(huán)境，促進(jìn)細(xì)胞生長增殖，有助于促進(jìn)新生血管和上皮形成，使組織完成愈合過程。

研究表明，胎牛皮（特指3~5月齡胎牛皮）結(jié)構(gòu)與人皮相似，尤其在真皮膠原纖維束三維結(jié)構(gòu)上存在較大相似性，與其它異種動物的真皮組織形態(tài)學(xué)相比較存在明顯的優(yōu)勢。除此之外，胎牛皮的細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)中含有大量促進(jìn)組織細(xì)胞生長的蛋白，且其抗原性成分更易除去，基質(zhì)成分更易被機(jī)體組織細(xì)胞作為營養(yǎng)物質(zhì)吸收。因生物行業(yè)對胎牛血清的需求量大，導(dǎo)致大量胎牛皮副產(chǎn)物被廢棄，然而胎牛皮經(jīng)抗原去除處理后，卻是一種優(yōu)異的創(chuàng)面修復(fù)材料，尤其是對慢性難愈創(chuàng)面，更是具有特殊的應(yīng)用價值。

天然蒙脫石是一種硅鋁酸鹽，具有層紋狀結(jié)構(gòu)和非均勻性電荷分布，對消化道內(nèi)的病毒、病菌及其產(chǎn)生的毒素、氣體等有極強(qiáng)的固定、抑制作用，使其失去致病作用；此外對消化道黏膜還具有很強(qiáng)的覆蓋保護(hù)能力，修復(fù)、提高黏膜屏障對攻擊因子的防御功能，具有平衡正常菌群和局部止痛作用。

通過組織工程技術(shù)去除組織中的抗原成分，并將蒙脫石結(jié)合在基質(zhì)上制成慢性創(chuàng)面修復(fù)基質(zhì)，最大程度地發(fā)揮胎牛皮細(xì)胞外基質(zhì)的組織再生誘導(dǎo)功能，并利用蒙脫石的固定抑制毒素作用，為組織再生提供環(huán)境，從而輔助組織再生。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種難愈創(chuàng)面修復(fù)基質(zhì)的制備方法，通過組織脫細(xì)胞技術(shù)將胎牛皮中的抗原成分去除，保留其組織中的活性基質(zhì)成分，利用微球制備技術(shù)，將胎牛皮細(xì)胞外基質(zhì)和蒙脫石有效結(jié)合在一起，形成微球顆粒，比表面積增大，能夠吸收并固定不利于組織再生的液體滲出，固定毒素，招募細(xì)胞在微球上定植增生，引導(dǎo)組織再生，從而實(shí)現(xiàn)創(chuàng)面的修復(fù)，旨在改善慢性難愈創(chuàng)面患者的久治不愈的問題。

一種慢性創(chuàng)面修復(fù)基質(zhì)的制備方法，包括以下步驟：

（1）取3~5月齡胎牛皮，剪切成不大于2mm的小塊，純化水洗滌3次，

（2）將步驟1中洗滌后的胎牛皮小塊置于-196℃~-20℃環(huán)境中冷凍24h及以上。

（3）將步驟2中冷凍的胎牛皮進(jìn)行恒溫水浴解凍，恒溫水浴解凍溫度為25℃~37℃。

（4）將步驟3中解凍完成的胎牛皮水溶液瀝干，純化水洗滌3次，瀝干，將胎牛皮轉(zhuǎn)移至Triton X-100—PBS溶液中，浸泡1h，Triton X-100—PBS溶液的濃度為2%~4%。