[發(fā)明專利]一種共培養(yǎng)肝細(xì)胞和肝竇內(nèi)皮細(xì)胞的技術(shù)方法及其應(yīng)用

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201811349920.9
• 申請日: 2018-11-12
• 公開（公告）號: CN109402044A
• 公開（公告）日: 2019-03-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 婁晉寧;張文健
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州瑞徠生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12Q1/02;A61L27/38
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1.一種共培養(yǎng)肝細(xì)胞系與肝竇內(nèi)皮細(xì)胞系的方法，其特征在于：將肝竇內(nèi)皮細(xì)胞系進(jìn)行缺氧培養(yǎng)一定時間，然后收獲肝竇內(nèi)皮細(xì)胞系，與肝細(xì)胞系以一定比例進(jìn)行共培養(yǎng)。

2.權(quán)利要求1所述的共培養(yǎng)方法，其中所述的缺氧培養(yǎng)是將肝竇內(nèi)皮細(xì)胞系在氧濃度≤3％的環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng)，實現(xiàn)氧濃度≤3％的環(huán)境的方法包括但不局限于使用三氣培養(yǎng)箱、可商業(yè)獲得的缺氧裝置、或密閉容器中通入95％氮氣和5％二氧化碳的混合氣體。

3.權(quán)利要求1所述的共培養(yǎng)方法，其中所述缺氧時間是3-24小時，優(yōu)選6-12小時。

4.權(quán)利要求1所述的共培養(yǎng)方法，其中所述共培養(yǎng)的肝細(xì)胞系和肝竇內(nèi)皮細(xì)胞系可以是任何哺乳動物來源，其中肝細(xì)胞系可以是來源于正常肝細(xì)胞也可以是來源于肝臟腫瘤的細(xì)胞系。

5.權(quán)利要求1所述的共培養(yǎng)方法，其中所述共培養(yǎng)體系中肝細(xì)胞系和肝竇內(nèi)皮細(xì)胞系的比例為1∶0.25～1∶4，優(yōu)選肝細(xì)胞系和肝竇內(nèi)皮細(xì)胞系的比例為1∶0.5～1∶2。

6.權(quán)利要求1所述的共培養(yǎng)方法，其中所述共培養(yǎng)的方式可以是平面培養(yǎng)也可以是三維立體培養(yǎng)；平面培養(yǎng)包括但不限于使用細(xì)胞培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、細(xì)胞工廠；三維立體培養(yǎng)包括但不局限于微載體培養(yǎng)、三維支架培養(yǎng)、凝膠培養(yǎng)。

7.權(quán)利要求1所述的共培養(yǎng)方法，其中所述共培養(yǎng)的起始方式可以是將兩種細(xì)胞分別收獲后按照所述比例混勻后接種，也可以是將肝竇內(nèi)皮細(xì)胞系收獲后制備成單細(xì)胞懸液，加入到生長有肝細(xì)胞系的培養(yǎng)體系中。

8.權(quán)利要求1-7所述的肝細(xì)胞系和肝竇內(nèi)皮細(xì)胞系共培養(yǎng)方法的應(yīng)用，其包括但不局限于利用共培養(yǎng)的肝細(xì)胞系和肝竇內(nèi)皮細(xì)胞系進(jìn)行藥物篩選或制備生物人工肝。