[發明專利]一種共培養肝細胞和肝竇內皮細胞的技術方法及其應用

在審

• 申請號: 201811349920.9
• 申請日: 2018-11-12
• 公開（公告）號: CN109402044A
• 公開（公告）日: 2019-03-01
• 發明（設計）人: 婁晉寧;張文健
• 申請（專利權）人: 蘇州瑞徠生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12Q1/02;A61L27/38
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種共培養肝細胞系與肝竇內皮細胞系的方法，其特征在于：將肝竇內皮細胞系進行缺氧培養一定時間，然后收獲肝竇內皮細胞系，與肝細胞系以一定比例進行共培養。

2.權利要求1所述的共培養方法，其中所述的缺氧培養是將肝竇內皮細胞系在氧濃度≤3％的環境中進行培養，實現氧濃度≤3％的環境的方法包括但不局限于使用三氣培養箱、可商業獲得的缺氧裝置、或密閉容器中通入95％氮氣和5％二氧化碳的混合氣體。

3.權利要求1所述的共培養方法，其中所述缺氧時間是3-24小時，優選6-12小時。

4.權利要求1所述的共培養方法，其中所述共培養的肝細胞系和肝竇內皮細胞系可以是任何哺乳動物來源，其中肝細胞系可以是來源于正常肝細胞也可以是來源于肝臟腫瘤的細胞系。

5.權利要求1所述的共培養方法，其中所述共培養體系中肝細胞系和肝竇內皮細胞系的比例為1∶0.25～1∶4，優選肝細胞系和肝竇內皮細胞系的比例為1∶0.5～1∶2。

6.權利要求1所述的共培養方法，其中所述共培養的方式可以是平面培養也可以是三維立體培養；平面培養包括但不限于使用細胞培養瓶、培養皿、細胞工廠；三維立體培養包括但不局限于微載體培養、三維支架培養、凝膠培養。

7.權利要求1所述的共培養方法，其中所述共培養的起始方式可以是將兩種細胞分別收獲后按照所述比例混勻后接種，也可以是將肝竇內皮細胞系收獲后制備成單細胞懸液，加入到生長有肝細胞系的培養體系中。

8.權利要求1-7所述的肝細胞系和肝竇內皮細胞系共培養方法的應用，其包括但不局限于利用共培養的肝細胞系和肝竇內皮細胞系進行藥物篩選或制備生物人工肝。