[發明專利]一種魁蚶來源的具有免疫增強活性的β-1，3葡聚糖內切酶及其編碼多核苷酸

有效

• 申請號: 201811349746.8
• 申請日: 2018-11-14
• 公開（公告）號: CN109402090B
• 公開（公告）日: 2022-10-21
• 發明（設計）人: 于榮敏;李春磊;朱建華
• 申請（專利權）人: 于榮敏
• 主分類號: C12N9/24
• 分類號: C12N9/24;C12N15/56;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19
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本發明涉及具有免疫增強活性的葡聚糖內切酶和編碼該酶的基因核苷酸序列，屬生物技術領域。本發明提供了葡聚糖水解酶系中關鍵酶之一的β?1,3葡聚糖內切酶蛋白質序列及其基因核苷酸序列。該酶來源于魁蚶(Arca inflata Reeve)，包含332個氨基酸，對應的編碼基因核苷酸全長為999bp，G+C含量為39.34％，為新的葡聚糖水解酶資源。利用該酶基因核苷酸構建的工程菌株能高效表達β?1,3葡聚糖內切酶，該酶在以昆布多糖為底物時的Kd值是13.09μM，生產的酶制劑可用于食品，醫藥，飼料，洗滌等工業，不僅可以解決富含葡聚糖的生物質廢料的再利用問題，還可以取得豐富的葡聚寡糖產生可觀的經濟效益。

技術領域

本發明涉及一種魁蚶來源的具有免疫增強活性的葡聚糖水解酶β-1,3葡聚糖內切酶及其編碼基因核苷酸，屬于生物技術領域，生產的酶制劑用于食品，醫藥，飼料，洗滌等工業，不僅可以解決富含葡聚糖的生物質廢料的再利用問題，還可以取得豐富的葡聚寡糖產生可觀的經濟效益。

背景技術

葡聚糖是植物和微生物細胞壁的主要成分，占植物總干重的30％～50％，是地球上分布最廣、含量最豐富的可再生碳源化合物，占地球總生物量的40％。據報道，我國每年光作物秸桿、稻梗、海帶等含葡聚糖較豐富的生物質就有5億噸之多，全球每年通過光合作用產生的植物生物質高達1.55×10⁹噸，其中尚有89％未被人們利用，而大量的秸桿、稻梗等含葡聚糖豐富的生物質利用率很低，大多采用燃燒的方法來處理，這樣就造成了環境污染，破壞了土壤的理化性質和喪失了有機質成分。所以，葡聚糖生物質的充分利用與有效的轉化對于解決當前的能源危機、糧食短缺、環境污染等有重大的意義。

葡聚糖酶是分解葡聚糖的一類酶，它能將葡聚糖分解為單分子葡萄糖或低分子量寡糖，充分的利用了葡聚糖生物資源。自1906年Sellieres在蝸牛消化液中發現β-1,4葡聚糖酶以來，葡聚糖內切酶的研究和應用受到了國內外學者的極大關注，取得了很大進展。目前，國內外學者通過篩選產酶菌株和分離純化尋找葡聚糖酶，再應用到食品、醫藥、飼料、紡織、洗滌和能源等工業中，不僅解決了葡聚糖的再利用問題還取得了很可觀的經濟效益。

葡聚糖酶是多酶組分的一個復雜酶系，主要來自于軟體動物、植物、真菌和細菌。根據酶功能的不同，分為三大類：葡聚糖內切酶、葡聚糖外切酶和β-葡萄糖苷酶。采用基因工程手段構建高效表達菌株可以實現葡聚糖酶的大量表達，目前有近100多個葡聚糖酶基因可在大腸桿菌中克隆和表達，主要是葡聚糖內切酶和β-葡萄糖苷酶。葡聚糖內切酶基因的獲得在葡聚糖生物質高效利用領域有巨大的應用潛力，同時可通過對葡聚糖內切酶的生物活性進行探索，以期更好得開發利用葡聚內切糖酶資源，實現生物量的轉化利用和酶制劑多功能化，這對人類的可持續發展具有非常重要的意義。

魁蚶(Arca inflata Reeve)屬于動物門，瓣鰓綱，蚶目，蚶科，是我國資源豐富的海產生物之一。魁蚶個大體肥，肉質鮮美，古書中記載魁蚶有“令人能食、益血色、消血塊和化痰積”之功效，營養價值和經濟價值很高，是我國及亞洲沿海地區重要的經濟貝類之一。通過查閱相關文獻資料發現，國外學者從魁蚶中表征和表達了一種具有抗菌活性和免疫調節活性的多肽，而魁蚶葡聚內切糖酶的研究未見報道。故魁蚶葡聚糖內切酶將高價值利用魁蚶這一海洋生物資源，擴大葡聚糖內切酶資源的同時具有重大經濟意義，為合理、高效利用海洋資源提供理論依據。

發明內容

技術問題

本發明的目的是提供一種具有免疫增強活性的β-1,3葡聚糖內切酶及其編碼基因核苷酸，屬于生物技術領域，生產的酶制劑用于食品，醫藥，飼料，洗滌等工業，不僅可以解決富含葡聚糖的生物質廢料的再利用問題，還可以取得豐富的葡聚寡糖產生可觀的經濟效益。

技術方案

本發明提供的魁蚶(Arca inflata Reeve)β-1,3葡聚糖內切酶，分子量51.03kDa，其氨基酸序列為SEQ ID NO.1。