[發明專利]一種研究口用型無煙氣煙草制品煙草特有的亞硝胺口腔釋放情況的方法

有效

• 申請號: 201811348045.2
• 申請日: 2018-11-13
• 公開（公告）號: CN109696491B
• 公開（公告）日: 2022-04-01
• 發明（設計）人: 楊繼;趙楊;段沅杏;米其利;高茜;管瑩;趙輝;劉春波;申欽鵬;楊柳
• 申請（專利權）人: 云南中煙工業有限責任公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 昆明正原專利商標代理有限公司 53100
• 代理人: 金耀生;于洪

1.一種研究口用型無煙氣煙草制品煙草特有的亞硝胺口腔釋放情況的方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟(1)，口用型無煙氣煙草制品的篩選：對待研究的某種口用型無煙氣煙草制品選取多顆進行重量檢測，計算該制品單顆重量平均值和方差；之后，選擇重量范圍在平均值±(1-3)倍方差范圍內的制品作為試樣進行后續測定；

步驟(2)，模擬溶出參數的確定：選擇多位身體健康的自愿者在自然狀態下吸食步驟(1)篩選出的試樣，并在事先確定的時間點收集殘留樣品和各自愿者唾液，每個時間點使用一顆樣品；

步驟(3)，體內實驗煙草特有的亞硝胺口腔釋放情況的測定：利用液相色譜質譜分別對待研究口用型無煙氣煙草制品、殘留樣品和自愿者唾液進行測試，以確定各時間段自愿者吸食樣品的煙草特有的亞硝胺溶出量；

步驟(4)，體外試驗模擬：采用全仿真模擬咀嚼機模擬吸食該待研究口用型無煙氣煙草制品，并根據步驟(3)得到的自愿者吸食樣品的煙草特有的亞硝胺溶出量和步驟(2)得到的唾液量，設置全仿真模擬咀嚼機的壓合力、咀嚼頻率、唾液量和口腔溫度參數；

步驟(5)，液相色譜質譜分析：利用液相色譜質譜分別對待研究口用型無煙氣煙草制品、殘留樣品和全仿真模擬咀嚼機中的人工唾液進行測試，用此測試結果來表征待研究口用型無煙氣煙草制品的煙草特有的亞硝胺口腔釋放情況；

步驟(6)，煙草特有的亞硝胺口腔釋放規律研究：采用上述全仿真模擬咀嚼機及設定的參數對同種口用型無煙氣煙草制品整個咀嚼過程中的不同時間點進行測試，繪制煙草特有的亞硝胺釋放曲線，進行煙草特有的亞硝胺口腔釋放規律研究；

對口用型無煙氣煙草制品、殘留樣品采用液相色譜質譜進行測試時，做如下處理：測試時取1顆制品或殘留樣品，加入0.01～0.1mol/L鹽酸水溶液1～5mL和100ng/mL的混合內標溶液100μL，渦旋混勻，超聲提取，離心，上清液全部上樣到活化后的Oasis HLB固相萃取柱上，加3mL體積濃度為2％甲醇水溶液淋洗，最后用3mL甲醇洗脫，收集洗脫液氮氣吹干，加入1.0～5.0mL甲醇超聲溶解，經0.2μm濾膜過濾至進樣瓶中，之后使用液相色譜質譜定量分析；

所述的混合內標溶液中的內標物為煙草特有的亞硝胺的氘代物，各個內標物的濃度均為100ng/mL；

液相色譜為高效液相色譜，參數如下：

色譜柱：Waters Acquity BEH C18柱，規格為：1.7μm，2.1mm×100mm；

流速：0.3mL/min；

柱溫：40℃；

進樣量：5μL；

流動相A：甲醇，流動相B：質量濃度為0.1％的乙酸水溶液；

測試時，采用梯度洗脫，梯度洗脫條件見表1；

表1

時間/min	流動相A/％	流動相B/％
0	10	90
2	100	0
4.5	10	90
6	10	90

；

其中，設置全仿真模擬咀嚼機的壓合力、咀嚼頻率、唾液量和口腔溫度的具體參數如表14；

表14儀器參數