[發明專利]一種食用菌菌種退化檢測試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 201811346503.9
• 申請日: 2018-11-13
• 公開（公告）號: CN109324007A
• 公開（公告）日: 2019-02-12
• 發明（設計）人: 朱巍巍;池景良;陳飛;徐沖;李楊;楊云橋;鄧春海;孟慶國;陳德偉;王艷華
• 申請（專利權）人: 遼寧省微生物科學研究院
• 主分類號: G01N21/33
• 分類號: G01N21/33
• 代理公司: 錦州遼西專利事務所(普通合伙) 21225
• 代理人: 王佳佳

1.一種食用菌菌種退化檢測試劑盒，其特征是：

該試劑盒組分及使用濃度：

試劑一：緩沖液，包括：Tris-HCl緩沖液，pH7.4，濃度0.01mol/L；MgCl₂，濃度0.5mmol/L；

試劑二：煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)，濃度10mmol/L；

試劑三：二羥基丙酮磷酸酯(DHAP)，濃度10mmol/L；

試劑四：3-磷酸甘油醛脫氫酶(GAPD)，濃度1μmol/L；

所述試劑一、試劑二、試劑三和試劑四的體積比為6:1:1:1。

2.一種利用權利要求1所述食用菌菌種退化檢測試劑盒檢測食用菌菌種退化的方法，其特征是：

具體步驟如下：

菌絲破碎、TPI提取：取食用菌菌絲0.2g，液氮研磨破碎后；精確稱取破碎菌絲0.1g置離心管中，4℃，8000g離心力下離心10min，取上清液為TPI酶液，置冰上，待測；

酶活測定：

紫外分光光度計調整波長至340nm，25℃預熱20min；

1mL石英比色皿中加入試劑一600μL，試劑二、試劑三、試劑四各100μL，加入步驟1提取的100μL TPI酶液充分混勻，25℃下進行酶促反應，計時，測量T₁時吸光值A₁，繼續反應至時間T₂，測量T₂時吸光值A₂；

TPI酶活力計算公式：

TPI(U)＝△A÷(ε×d)×V÷W÷△T

其中：△A：A₂－A₁；

ε：NADPH摩爾消光系數，6.22×103L/mol/cm；

d：石英比色皿光徑，1cm；

V：反應體系總體積，1mL；

W：反應體系內待測樣本的質量，g；

△T：T₂－T₁，體系反應時間，min；

以原始菌株為對照，對照和檢測樣本各設置5個平行，測定TPI酶活力數值后，采用統計學進行差異顯著性分析，當P值P＜0.05時，判定為退化菌種。

3.根據權利要求2所述利用食用菌菌種退化檢測試劑盒檢測食用菌菌種退化的方法，其特征是：所述T₁＝1min，T₂＝10min。

4.根據權利要求2所述利用食用菌菌種退化檢測試劑盒檢測食用菌菌種退化的方法，其特征是：吸光值A₁和A₂的檢測范圍為0.2-0.6之間，如果高于0.6，稀釋待測樣本重量或縮短反應時間；如果低于0.2，增加檢測樣本重量或延長反應時間。