[發明專利]通過檢測產品進行質譜法判別維拉帕米個體化用藥的方法

在審

• 申請號: 201811345491.8
• 申請日: 2018-11-13
• 公開（公告）號: CN111172268A
• 公開（公告）日: 2020-05-19
• 發明（設計）人: 馬慶偉;鐘逾;張海燕;劉昕超
• 申請（專利權）人: 北京毅新博創生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種通過檢測產品進行質譜法判別維拉帕米個體化用藥的方法，其中所述檢測產品通過特定引物組合物所制備，該引物組合包括針對能判別維拉帕米個體化用藥型的8個SNP標記的PCR引物對和延伸引物，其中，PCR引物序列對選自如SEQ ID NO:1a-8a所示的序列，延伸引物序列選自如SEQ ID NO:1b-8b所示的序列。

2.權利要求1所述的方法，其中該引物組合物分為4個獨立進行的多重PCR反應引物組合物，并且所述序列如下所示：

3.權利要求2所述的方法，其中各位點對應的延伸引物及延伸產物分子量如下所示：

4.權利要求3所述的方法，其中上述PCR引物序列為核心序列，其在5'端可包括5-15個保護堿基序列，優選為10bp的tag：ACGTTGGATG。

5.權利要求3所述的方法，其中延伸引物5'端可增加作為接頭的堿基序列，優選接頭堿基序列為1-15個堿基，更優選為1-3個堿基。

6.權利要求1-5任一所述的檢測方法，其中該檢測產品還包括：

(1)用于PCR的反應試劑，包括：上述擴增引物對，耐高溫的DNA聚合酶，dNTPs，PCR反應緩沖液；

(2)用于PCR產物純化的試劑；

(3)用于單堿基延伸反應的試劑，包括：上述延伸引物，耐高溫的單堿基延伸酶(SAP酶)，ddNTPs，延伸反應緩沖液。

7.權利要求6所述的方法，其中還包括用于質譜檢測且保護上述SNP組合的載體，優選質譜芯片和質譜儀。

8.權利要求1-7任一所述的方法，其中包括以下步驟：

(1)多重PCR：使用上述PCR引物對，在兩個反應體系中，對上述8個SNP位點所在DNA區域同時進行擴增，得到含8處多態位點所在DNA區域的PCR產物；

(2)PCR產物純化：對步驟(1)得到的PCR產物進行純化，以減少對后續反應的干擾；

(3)單堿基延伸：使用上述8條特異性的延伸引物，在兩個反應體系中，對步驟(2)得到的純化后PCR產物進行多重單堿基延伸，延伸引物在對應的SNP位點處延伸一個核苷酸，該核苷酸與SNP位點處的基因型互補配對；

(4)延伸產物純化：對步驟(3)得到的延伸產物進行純化，以獲得高純的延伸產物，避免鹽離子等雜質對后續檢測的影響；

(5)質譜儀檢測：將步驟(4)得到的純化產物點在含有基質的靶片上，放入質譜儀進行檢測。

9.權利要求8的方法，其中步驟2的純化過程可以選自堿性磷酸酶消化、堿性磷酸酶和外切酶ExoI消化、切膠純化、PCR純化柱過柱。